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1、激素对小鼠胚胎体外发育的影响论文.freelformouseembryoculture,andtheeffectsoftoneonmousepreimplantationembryosinvitroouseembryosediatodeterminetheoptimasystem,andthendifferentconcentrationhormoneediumtoobservetheeffectofhormoneonmouseembryodevelopmentinvitro.HTF+10%FBSmediumofmousepre
2、implantationembryodinviting.Afterhormoneofdifferentconcentrationsandkindsedium,thedevelopmentrateofdifferentstagesembryosdeclinesparedonecoulddepressdevelopmentofmousepreimplantationembryosinvitro,andlessensthedevelopmentalproportionofdifferentstageembryos,.freelone;
3、mousepreimplantationembryos;developmentinvitro;effects早期胚胎体外培养技术在发育生物学、胚胎移植、转基因动物等领域的研究工作中都有很重要的作用1。早期胚胎发育是一个复杂的过程,在此过程中,可受到各种激素的影响,激素通过不同途径来调控早期胚胎发育2,3。目前,在不孕治疗中经常使用到各种促排卵激素,在孕妇妊娠期间也经常使用一些激素类药物,有报道,使用不同剂量和不同种类的激素,可能影响到胚胎的质量4-7。另外,环境中也存在着多种激素的类似物,这些激素和激素类似物对胚胎发育的影响研究
4、,目前还缺乏系统性,尤其是较高浓度的激素水平如何影响胚胎的发育、胚胎发育与激素的浓度之间是否存在着剂量依存性、同种激素对不同发育阶段的胚胎的影响等,这些都还不十分明了,很有必要进行深入的研究。本研究旨在以小鼠为试验动物模型,在基础胚胎发育培养液中分别加入不同种类和不同浓度的激素,以探讨其对鼠早期胚胎体外发育的影响机理。1材料与方法1.1试验试剂孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)购自宁波第二激素厂,HTF培养液购于美国In-Vitro公司,透明质酸酶购自Vitrolife公司,BSA粉剂购自BovomaX
5、公司,FBS(胎牛血清)购自Gibco公司。胚胎操作液配制:CZB-HEPES(NaCl为478.9mg/100mL,KCl为36.3mg/100mL,KH2PO4为15.9mg/100mL,MgSO4为14.195mg/100mL,NaHCO3为210.0mg/100mL,C6H12O6为100.0mg/100mL,CaCl2·2H2O为25.0mg/100mL,乳酸钠(60%糖浆)为370mg/100mL,链霉素为50mg/100mL,青霉素为60mg/100mL,HEPES为238.0mg/100mL)。使用时,添加BSA
6、粉剂4mg/mL,过滤除菌,使用前加温,用于体外胚胎的收集和清洗操作。1.2试验动物及处理昆明品系性成熟小鼠,6～8周龄,购自浙江中医药大学动物实验中心,饲养于光照控制(10L∶14D)、恒温恒湿的饲养室,自由采食饮水。雌鼠于17∶30左右腹腔注射10IU孕马血清促性腺激素(PMSG),48h后腹腔注射10IU人绒毛膜促性腺激素(HCG),HCG注射后与正常雄鼠按1∶1比例合笼,次日清晨检查有无阴栓。有阴栓者于注射HCG后14～21h采用颈椎脱臼法处死小鼠。1.3胚胎收集取出输卵管移入操作液,在体视显微镜下找到输卵管膨大部,划破
7、输卵管膨大部使受精卵(云雾状)游离出来。用枪头吸出卵团,移入含透明质酸酶的液滴中反复吹打,镜下观察,当受精卵游离出来后,用移卵管(自制巴氏管)吸出来移入新液滴内清洗3次,备用。1.4试验分组与胚胎培养1.4.1检查通过2-细胞阻滞情况。收集洗净的胚胎,选择形态较好的受精卵分为2组,分别置于HTF+10%FBS和HTF+4mg/mLBSA培养液小滴中。于37℃、5%CO2、95%空气、饱和湿度的培养箱中培养,24h后观察2-细胞发育情况并做好记录。1.4.2检查培养体系。收集洗净的胚胎,选择形态较好的受精卵分为多组,分别置于HTF
8、+10%FBS培养液小滴中。于37℃、5%CO2、95%空气、饱和湿度的培养箱中培养,每24h观察1次,并记录各发育阶段胚胎数目。1.4.3激素对胚胎发育的影响。选择形态较好的受精卵分为多组,分别置于添加100、50、10IU/mL的HCG和100、50、10I
