herceptin下调her2表达后对pi3k-akt通路蛋白表达的影响论文

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1、Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响论文【摘要】目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响，探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3，免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达，ethods:TheHER2overexpressedbreastcancercelllineSKBR-3munocytochemistry,andtheexpressionsofp-AktandBadountofp-Aktprotei

2、nofHerceptintreatedgroupdecreasedsignificantlyto53.5%(P0.01),theamountofBadproteinofHerceptintreatedgroupincreasedsignificantlyby0.83fold(P0.01).Theratesofp21Cip1和p27Kip1positivecellsofHerceptintreatedgroup（67%and56.1%respectively）paredtotheuntreatedgroup（19%and21.4%respectively）increasedsignificant

3、ly(P0.01).Conclusion:HerceptincandoproteinBad,p21Cip1andp27Kip1,thustoinhibittheproliferationandpromotetheapoptosisoftumorcells.KeyoForma3111）中培养。依SKBR-3细胞Herceptin（Genentech）MTT试验，IC50为1μg/ml处理48h。本研究采用1μg/mlHerceptin处理48h来下调HER2的表达为处理组，未作任何处理为对照组。1.2HER2、p21Cip1和p27Kip1表达的检测经多聚甲醛固定的培养细胞的爬片（检测HER2和

4、p21Cip1）和经乙醇固定的培养细胞的石蜡包埋切片3（检测p27Kip1），采用免疫组化S-P试剂盒（福州迈新），DAB显色，苏木素复染。HER2阳性表达（棕色）位于细胞膜和（或）细胞浆，p21Cip1和p27Kip1的阳性表达（棕色）分别位于细胞浆和细胞核。高倍镜下随机选取几个视野观察1000个细胞，得出阳性细胞百分率并拍照。1.3arker。实验重复3次以上，内参采用β-actin，Gel-ProAnalyzer4.0软件分析蛋白条带积分吸光度（IA）值。1.4统计学处理方法两组率的比较采用x2检验，两组均数比较采用t检验。2结果2.1Herceptin处理SKBR-3细胞对HER2表达

5、的下调对照组（见图1a）HER2阳性细胞率为78.3%，处理组（见图1b）HER2阳性细胞率为37.4%，二者差异有显著性（P0.01）。2.2HER2表达的下调对p21Cip1和p27Kip1蛋白表达的影响抗p21Cip1和抗p27Kip1免疫组化结果：对照组（见图2a和图3a）p21Cip1和p27Kip1阳性细胞率分别为19.1%和21.4%，明显低于处理组（见图2b和图3b）（分别为67.3%和56.1%），二者差异有显著性（P0.01）。2.3HER2表达的下调对p-Akt和Bad蛋白表达的影响KN胃癌细胞中，Herceptin未下调PI3K，也未抑制肿瘤细胞生长11。由此推测，对于

6、不同肿瘤细胞，Herceptin不一定都是作用于PI3K/Akt信号传导通路的，其临床疗效不同可能与其是否下调PI3K/Akt信号有关。PI3K/Akt信号传导通路在肿瘤发生、发展中的主要作用有：①抑制细胞凋亡：Akt可调控多个与细胞凋亡有关的蛋白家族从而抑制凋亡。②促进细胞周期进行：PI3K可通过Akt、mTOR传递有丝分裂信号，使细胞周期主要蛋白如cyclin、CDKs的翻译上调，使细胞周期加速12。③促进血管形成。④促进肿瘤侵袭。Hanada等13研究表明Akt能抑制前凋亡蛋白Bad及caspase-9的活性。本研究结果显示，下调HER2表达后p-Akt蛋白含量明显降低，Bad蛋白含量明

7、显升高，与Hanada等结论一致，因此，Herceptin下调HER2表达，可能通过促进Bad表达而促进细胞凋亡。在对卵巢癌及前列腺癌的研究中均发现，抑制PI3K活性可诱导CDKs抑制p21Cip1的表达，抑制细胞周期进展12,14。在黑色素瘤及骨肉瘤细胞株中，PI3K抑制剂可以诱导CDKs抑制p27Kip1的表达，从而抑制癌细胞的增殖14。Akt对CKIs如p21Cip115和p27Kip110