stgc3基因表达下调对np69细胞系蛋白质表达谱的影响

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文STGC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响研究生姓名：陈星星指导教师姓名、职称：贺修胜教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：肿瘤发病的易感分子机制2013年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论

2、文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学

3、位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据本课题资助项目1.国家自然科学基金课题基金项目（课题编号：No.81172575）2.教育部博士学科点专项基金资助项目（课题编号：No.20104324110002）3.湖南省科技厅资助项目（课题编号：No.2011SK3088）4.湖南省科技厅资助

4、项目（课题编号：No.2011SK3089）万方数据目录一、中文摘要……………………………………………………1二、英文摘要……………………………………………………3三、论文正文前言…………………………………………………………5技术路线……………………………………………………7材料与方法…………………………………………………8实验结果……………………………………………………18讨论…………………………………………………………38结论………………………………………………………….46四、参考文献……………………………………

5、…………………47五、附录一………………………………………………………..56六、附录二…………………………………………………………57七、综述……………………………………………………………58八、在读发表的论文与参与课题………………………………68九、致谢………………………………………………………….69万方数据STGC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响硕士研究生：陈星星导师：贺修胜教授中文摘要目的：运用RNAi技术，敲低NP69细胞系中STGC3基因的表达；采用iTRAQ同位素标记及质谱分析，研究ST

6、GC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响，筛选差异表达蛋白质分子，探讨STGC3基因调控的相关分子网络，为阐明鼻咽癌发病的分子机制提供强有力的实验依据。方法：参照RNAi的设计原则，设计靶向干扰STGC3基因表的发夹样序列（shorthairoinRNAs,shRNA），构建pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3真核表达载体，并对重组质粒进行测序及比对分析；随后将重组质粒用TMLP2000转染NP69细胞，经G418筛选，建立稳定低表达STGC3的p

7、RNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69细胞系；采用RT-PCR验证pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三组细胞STGC3基因的mRNA表达水平；分别提取pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三组细胞的总蛋白，进行蛋白酶解，iTRAQ同位素标记，高效液相色谱仪分离，四级杆-静电场轨道阱质谱仪进行质谱分析，获取蛋白质表达丰度信息，对所

8、获取蛋白质表达信息进行数据库搜索分析，筛选差异表达蛋白质分子；运用生物信息学方法，分析差异蛋白质的相互作用。结果：经测序及Blast比对，证实pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重组质粒构建成功；通过荧光显微镜观察，转染pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRN