谈全天麻胶囊中天麻的dna鉴定

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1、谈全天麻胶囊中天麻的DNA鉴定天麻为传统的名贵药材，隶属兰科(Orchidaceae)植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥块茎，为多年生草本植物，主产于四川、云南、贵州、陕西等地，天麻主要成分为天麻素及其苷元，具有广泛的药理作用，如镇静催眠、抗惊厥等[1]。因此，含天麻药材的中成药越来越多，如今药材掺伪现象极为普遍，市场上常见的假天麻紫茉莉根、大丽菊块根、芭蕉芋、马铃薯等，而药典中收录的中成药质量检测方法并不能有效的检测出某药材是否掺伪，随着分子生物学的发展，李相陵等采用CTAB法成功从天麻干品粉末中提取DNA，DNA纯度较好，产率较高，可用于分子生物学研究。本课题组陈

2、蓉等已成功对中成药药材进行DNA技术鉴定，该方法特异性强，操作简单，检测速度快。因此我们基于该技术研究对中成药中天麻掺伪进行检测，采用全天麻胶囊作为考察对象(其制法为：取天麻粉碎成细粉，过筛，混匀或制成颗粒，装入胶囊即得)该胶囊只含天麻一种药材，且未经过提取纯化等工艺过程，方便天麻DNA的鉴定。　　1材料和方法　　1.1材料　　在药店随机购买某品牌的全天麻胶囊，胶囊内容物为药材细粉。全天麻对照药材购自中国药品生物制品鉴定所;批号为：HXRD-26D1：GGTGATGATAAGGTATTGTAACGAT，M2：AAGCAGCAAAATTGGATAGTAGGAG。引物序列发往上海生工生

3、物公司合成，引物均稀释成25μm。1.4利用PCR扩增出目的条带引物特异性检测用以上制备的DNA模板进行PCR扩增，扩增总体积为50μL，含40.5μLH2O，10缓冲液5μL，dNTPS1μL，模板(天麻对照药材基因组DNA)1μL，T1引物1μL(CCCATAGCCATCCAAATCTG)，T2引物1μL(GGTGATGATAAGGTATTGTAACGAT)，Taq酶0.5μL，混合后置PCR仪中反应。温度和时间参数为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸30s，循环35次，最后延伸7min。

4、在PCR管中加入40.5μLH2O，10缓冲液5μL，dNTPS1μL，模板(马铃薯基因组DNA)1μL，M1引物1μL(GGTGATGATAAGGTATTGTAACGAT)，M2引物1μL(AAGCAGCAAAATTGGATAGTAGGAG)，Taq酶0.5μL，混合后置PCR仪中反应。温度和时间参数为：94℃预变性3min，94℃变性30s，61℃退火45s，72℃延伸30s，循环35次，最后延伸7min。中成药检测：在PCR管中加入37.5μLH2O，10缓冲液5μL，dNTPs1μL，模板(全天麻胶囊基因组DNA)

5、4μL，M1引物1μL(GGTGATGATAAGGTATTGTAACGAT)，M2引物1μL(AAGCAGCAAAATTGGATAGTAGGAG)，Taq酶0.5μL，混合后置PCR仪中反应。温度和时间参数为：94℃预变性3min，94℃变性30s，61℃退火45s，72℃延伸30s，循环40次，最后延伸7min。取扩增产物7.5μL于3%琼脂糖凝胶电泳15min后，溴乙锭染色，在琼脂糖凝胶成像系统中检测和照相。　　2实验结果　　马铃薯引物只能在马铃薯基因组DNA中扩增出160bp的条带，在天麻DNA中则不扩增，马铃薯引物的特异性。马铃薯引物在全天麻胶

6、囊中扩增出160bp的条带，与在马铃薯基因组DNA中扩增的条带一致，全天麻胶囊检测图。　　3讨论　　实验结果表明天麻引物和马铃薯引物分别在天麻和马铃薯中扩增出目的DNA的条带，条带的碱基数目符合引物设计时的数目，证明该两条引物能成功地在天麻和马铃薯中扩增出目的DNA。结果二显示用马铃薯引物在全天麻胶囊中扩增的条带与在马铃薯基因组中扩增的条带一致，说明该品牌的2.5模型验证2批未知含量川乌共计10份供试品进行近红外漫反射(NIR)含量测定，并与HPLC含量测定结果进行比较。　　4结论　　本实验运用近红外(NIR)光谱技术，采用偏最小二乘法(PLS)为川乌毒性成分含量的测定提供了一种快

7、速检测方法。并利用10份未知样品对其模型测定精确度进行检测，结果表明NIR测定值可以较准确的逼近HPLC测定值，所建立的PLS定量校正模型具有较好的预测效果,模型可以准确预测其覆盖范围内的川乌双酯型生物碱含量，为中药质量控制过程中快速质检提供了一种新思路。