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1、β葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响【关键词】β葡聚糖胞内游离钙环磷酸腺苷RAPlevelsofRAethods：Cellgroetricassay,proteinsynthesisbyLoandcAMPinedcontinuously.Results：Cellgroinaftertreatmentinafterthetreatmentandmaintainedathighlevel.Conclusion：CytosoliccalciumandcAMPportantsignalmoleculesinevaluatingeffecto
2、fβglucanonRAP;RAI1640、胎牛血清购自Gibco公司；Fura2AM购自中国科学院药物所；β葡聚糖和EGTA购自Sigma公司；其余试剂均为进口分装或国产分析纯。1.2细胞培养小鼠巨噬细胞RAI1640。1.3细胞生长曲线和蛋白质含量的测定取对数生长期的细胞按3×103个/孔接种于96孔板(Cellstar),共接种16板。待细胞贴壁后，吸出孔内的培养液和未贴壁的细胞。各给药组分别给予含12.5，25，50，100，200和400μg/mlβ葡聚糖的培养液200μl，进行培养。每板上作对照,每个β葡聚糖浓度作3个平行孔。每天
3、定时取上述培养板2块,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,然后将其中1块板以中性红比色法［1］检测细胞生长情况,另1板用lol培养瓶内接种RAP浓度测定按试剂盒(上海中医药大学)说明书进行。在相差显微镜下观察,β葡聚糖对RAP含量的影响β葡聚糖刺激1min时细胞内cAMP明显增高(P<0.01),刺激后5～10min则cAMP含量开始下降,但仍较基础水平高(图5)。3讨论巨噬细胞是机体免疫系统专职吞噬细胞之一,源自血液单核细胞,广泛分布于所有组织中,成为机体抗入侵微生物的第一道防线,在机体抗真菌感染中也起着重要作用。它通过免疫球蛋白受体和补体
4、受体识别并吞噬受调理素作用的微生物;对于未经调理作用的微生物,则通过一组胚系编码的蛋白-模式识别受体(PRRs)［4］迅速识别表达于微生物表面的称作病原相关微生物模式（PAMPs)的保守微生物分子,如主要存在于革兰阴性菌的脂多糖、革兰阳性菌的磷脂酸以及真菌的葡聚糖等［5］。β葡聚糖是真菌细胞壁含量最高的多糖,具有广泛的生物学效用。已有研究表明,β葡聚糖可促进多种细胞活化［6］。我们注意到微量β葡聚糖虽可促进RAP。胞内游离钙和cAMP是细胞内重要的信使分子,介导许多重要的生理功能。通过观察细胞游离钙和cAMP的变化,可以了解β葡聚糖信号在靶细胞
5、内的传导机制。本实验结果表明,β葡聚糖刺激可在2～5min内使细胞内游离钙迅速升高,而且在一定范围内其上升幅度与β葡聚糖剂量相关。细胞外Ca2+存在与否对β葡聚糖刺激后胞内游离钙波动有明显影响,提示胞内游离钙的升高主要于细胞外Ca2+的内流而非细胞内钙库的动员。β葡聚糖使细胞内cAMP浓度升高是否与β葡聚糖促细胞增生作用有关,尚有待进一步研究,但我们的实验结果提示,cAMP含量变化与细胞蛋白合成的量相关。【参考文献】［1］闻平,何艳,叶庆林,等.中性红比色法检测细胞增殖活性［J］.镇江医学院学报,2000,10(1):161-163.［2］L
6、oeasurement,1951,193(1):265-275.［3］YeQL,，SmytheS，etal.Thyrotrophin,butnotforskolin,increasesintracellularfreecalciumandcalmodulininpigthyroidcells［J］.JEndocrinol,1991,129(2):291-299.［4］DinizSN,NomizoR,CisalpinoPS,etal.PTX3functionasanopsoninforthedectin1dependentinternalizatio
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