高效液相色谱法测定格列美脲片含量及有关物质

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1、万方数据第3卷第5期20{13年10月1671一1815(’AIY3)05—0431—03科学技术与工程ScienceTeehnol092vundEr妞neefingVoI3No5October，'舢@20113Sci％ehⅡ1w．高效液相色谱法测定格列美脲片含量及有关物质王维贤高立军魏君谢剑炜(军事医学科学院毒物药物研究所，』b京lm850)摘要建证高效液相色谱法娜定格到蔓腮片含量及有关物质。采用ZorbaxSB-cls色谱柱(4．6iiul×250lnln，5f堋)，流动相为0025mal·L。磷酸二氢钾溶液(稀氢氧化钾溶液调节至pH5．2)：甲醇(25

2、：75)，流速1mL·min～，检测波长为228nrr-。在进样量005～1．0t*g时，与峰面积呈良好线性，r=0．9999(n=7)，平均回收率9997％，日内和日间船D分别为0，66％及077％(n=9)。有关物质可得到很好地分离，该法简便、准确、专属。哭键词格列美脲片t断效液相色谱法含量有关物质巾图法分类号R9141；文献标识码A格列美脲(giimepi]'ide)是一种新的磺酰脲类降糖药1，由德国Hoecbs!公司研制开发，1995年在荷兰和瑞士上市，1996年获美国FDA批准。2001年军事医学科学院毒物药物研究所按j类新药开发，剂型为片剂，规格

3、lnlg，其适应症是治疗饮食和体育锻炼未能适当控制疾病症状的Ⅱ型糖眼病。浚药降糖活性高，低血糖和心血管副作用少，且剂量低，服用方便。文献撒道用高效液相色谱法2J，放射同位素方法【3o测定格列美脲体内血药浓度及代谢产物，片剂的有关物质测定未见文献报道。本文建立了格列美脲片的高效液相色谱法，可用于该片的含量及有关物质测定。1仪器与试药日本只市655型高效液相色谱仪，638紫外检测器，655--60微处理机；几本岛津160^,分光光度计；Oi．on710型pH汁；德国R200DSortoritls电子天平；针筒式微孔膜过滤器，规格有机系，直径13lIlln，0．4

4、5Ⅲ(天津腾达过滤{}{}件厂)；甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯；水为重蒸馏水；格列美脲对照品及片剂(本所研制)；4-[2-(3一乙基．4一甲基-2一氧一3一吡咯啉一1．甲酰胺基)乙基]苯磺酰胺(简称杂质2，本所合成纯度99．5％)。2色谱条件tara)；流动相为o025rnol-L。1磷酸二氢钾溶液(稀氢氧化钾溶液调节至pH52)：甲醇(25：75)j检测波长为228，-m；流速hId．·min；进样量20血。在该色谱条件下，格列美脲与有关物质分离良好，对照品、辅料及样品色谱图见幽1。格列美脲的理论塔板数为4200，与最近的杂质峰分离度太于1．5。空白辅料

5、对测定无干扰。0s1005i00510t／mimABC图l色谱图A一对照怂(ch哪lcdre(eteneP踟嘶Ⅲ蹴)．B一辅料(exeipi蚍s)，c样品(蛐坤1e)，1一杂质1．2_杂质2，3一杂质34一格州美(gli”pMcle)。色谱柱为ZorhaxSB—c，s柱(4．6mm×250m-，53标准曲线的测定3．1含量测定的标准曲线取格列美脲对照品10mg，精密称定，置100mL量万方数据432科。。}+技术与『．程3卷瓶中．加流动卡

6、]适量，在温水浴中超声处坪，使主药溶解，摇匀放冷至室温．加流动相至刻度，摇匀。从中精密吸取0．25，0．5，】．0，2O

7、，30，4．0，5．Om，．，分别蚩于】O“。量瓶巾，加流动千H至刻度，摇匀，分别取20血沣人液梢色谱仪，以列照品峰面积y与进样量I薯(似)作图。格列美帐进样量在005～l0㈣，与峰面积呈良好线性。经统计得回归方程Y=9．352×102+7．253×10s』，r=0．999932有关物质的标准曲线取杂质2对照品5mg，精密称定，置I()0rnL量瓶中，加流动相适量，在温水浴中超声处婵，使主药溶解，孺匀放冷基室温，加流动相至刻度，摇匀。从中精密吸取0．25，0．5，1．0，20，30，4．0，5．0HlL，分别置1二∞“．量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别取加

8、以注入液相色潜仪，以对照品峰面积Y与进样鼍，Y(”g)作l冬j，，杂质2进样量在4—10(3ng，与峰面积呈良好线忭。经统计得回归力程Y=3．426×102+2．231×104X，r=09999。，t。4重复性试验依法配制格列美脲2．5、20、50}螭·mL。低、巾、高3种浓度对照晶溶液，分别进样6次，依法测定，结粜表明，方法精密度良好，RSD为分别为0．82nA，，068％，0．60％(n=6)．．『司时，精密称取同-批号的格列荚且

9、j{片细粉6份，照含量测定项下方法，依法测定，6次洲定结果的平均值为9935％，骼D为0．46％。5回收率测定依法配制格列美

10、脲25、20、50big·mL‘低、中、高3种浓度溶