高效液相色谱法测定西司他丁钠的含量及有关物质

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1、高效液相色谱法测定西司他丁钠的含量及有关物质【摘要】目的建立HPLC测定西司他丁钠的含量和有关物质。方法采用高效液相法色谱(HPLC法)，以C18柱(4.6mm×250mm，5μm)为分析柱，乙腈∶0.1mol/L磷酸铵(用磷酸调pH至6.8)(30∶70)为流动相，检测波长210nm，流速0.8ml/min，柱温50℃。结果西司他丁钠在0.08～0.60mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系，平均回收率为100.2%(n=9)。西司他丁钠与相邻杂质峰完全分离，西司他丁钠的检测限为1.8ng，定量限为5.9n

2、g。结论该方法可靠、简便、准确。可作为西司他丁钠含量和有关物质的测定方法。【关键词】西司他丁钠；高效液相色谱法；有关物质ABSTRACTObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofthecontentandtherelatedsubstancesofcilastatinsodium.MethodThecolumn:C18(4.6mm×250mm,5μm)obilephaseol/Lphosphateammonium(adjusttopH6.8,the

3、flol/minandthecolumntemperaturencouldbepletelyseparatedfromotherimpurities.Limitofdetectionforcilastatinsodiumitofquantitationforcilastatinsodiumethodisreliable,convenientandaccurate.Themethodcanbeusedfordeterminationofcontentandrelatedsubstacesofcilastatins

4、odium.KEYP)的增效剂。IMP单独给药时，经肾小球过滤或分泌后，被近端肾小管上皮细胞刷状缘中的去氢肽酶I水解失活60%～95%，导致尿中活性药物浓度降低。CS能阻抑IMP进入肾小管上皮组织，减少IMP的排泄并保护IMP在肾中不被破坏，可防止因IMP引起的肾小管坏死，减轻药物的肾毒性，增加疗效。两者合用后西司他丁减少IMP被肾小管上皮细胞的去氢肽酶水解，可使IMP的AUC增加20%，在尿中回收的原形药物多达70%，所以在制剂时IMP/CS以等量配制［1］。IMP/CS适用于多种细菌的混合感染和需氧/厌氧菌

5、的混合感染以及在尚未确定病原菌前的早期治疗，近年广泛用于抗感染治疗，取得满意结果，已成为治疗严重感染的一线药物。对于原料CS的含量测定，国外药典采用电位滴定法［2］，国内未见报道。本研究建立HPLC法测定CS含量和有关物质，得到满意结果，现报道如下。1仪器与试药岛津LC2010A型高效液相色谱仪，ultiSpec1501紫外分光光度计。CS原料3批(由某药厂提供；批号20044006、20044007和20044008)；CS对照品(纯度97.8%)由河北省药品检验所提供；乙腈为色谱纯，磷酸铵、磷酸二氢钾、

6、盐酸、30%过氧化氢、氢氧化钠均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DiamondC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈∶0.1mol/L磷酸铵(精密称取磷酸铵20.31mg，加1000ml水使溶解并稀释至刻度，用磷酸调至pH6.8)(30∶70)；流速0.8ml/min；检测波长210nm；柱温50℃；进样量20μl，结果见图1。1：西司他丁钠；2、3：未知杂质图1西司他丁钠HPLC有关物质图谱2.2系统适用性(1)柱效与不对称度取CS对照品溶液进样，理论塔板数按CS峰计算为7070。

7、(2)进样精密度试验取CS对照品溶液连续进样5针，其峰面积的RSD为0.008%，表明系统精密度良好。2.3专属性对CS对照品进行高温、氧化、强酸、强碱的破坏性试验，以研究其降解产物与主峰的分离情况。在选定的色谱条件下，取上述破坏后供试品溶液进样，结果主峰与各杂质峰获得有效分离，提示氧化和强酸破坏产生较大杂质，高温和强碱破坏总杂质量和杂质个数变化不大，表明CS在氧化、强酸条件下较不大稳定，强碱和高温对样品影响较小。2.4准确度精密称取CS对照品及已知含量的样品各三份，分别置于100ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度

8、，制成含量测定浓度的80%、100%和120%的溶液，摇匀，滤过，进样，结果低、中、高3个浓度的回收率(n=3)分别为100.1%(RSD=0.28%)、100.8%(RSD=1.24%)和99.8%(RSD=0.53%)；平均回收率为100.2%(n=9)(表1)，表明方法准确度良好。表1回收率测定结果2.5线性和范围精密称定CS对照品，置25ml容量瓶中，加水使溶解，加至刻度，分别