高效液相色谱法测定呋苄西林钠含量与有关物质论文

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1、高效液相色谱法测定呋苄西林钠含量与有关物质论文潘颖项竞佐刘浩仇仕林【摘要】目的建立呋苄西林钠含量与有关物质的HPLC分析方法。方法采用ODS柱，以磷酸盐缓冲液(0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.5)∶乙腈(75∶25)为流动相A；以磷酸盐缓冲液∶乙腈(20∶80)为流动相B，含量测定以流动相A进行等度洗脱，有关物质测定采用线性梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm。结果呋苄西林在0.0964～19.29μg的范围内，进样量与峰面积的线性关系良好(r=0.9999).freelinationoffurben

2、icillinsodiumanditsrelatedsubstancesbyHPLCABSTRACTObjectiveToestablishaneethodfordeterminationoffurbenicillinsodiumanditsrelatedsubstances.MethodAnODScolumnol/Lpotassiumdihydrogenphosphatesolution,.freelobilephaseB:phosphatebuffer∶acetontrile(20∶80),isocraticalelutionination

3、andlineargradientelutionforrelatedsubstances.Theflol/min.Thedetection.ResultsTherelationshipbetplesizes(arangefrom0.0964μgto19.29μg)andpeakareashadshoitis1.2ng.ConclusionThemethodcanbeusedtoanalyzefurbenicillinsodiumqualativelyandquantitively.Themethodiseasy,highlyspecific,e

4、fficientandreproducible.KEYerckLichrosper100RP18e(250mm×4.0mm，5μm)；流动相A：磷酸盐缓冲液(0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.5)∶乙腈(75∶25)；流动相B：磷酸盐缓冲液∶乙腈(20∶80)；含量测定以流动相A进行等度洗脱；有关物质进行线性梯度洗脱，0～15min：A为100%，B为0；45min：A为0，B为100%；55min：A为100%，B为0。流速1.0ml/min，检测波长254nm；进样体积10μl。2.2测定法(1)有关物质取本品约50

5、mg，精密称定，置25ml量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。两个生产企业产品的有关物质色谱图分别见图1、图2。(2)含量测定取本品及对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，分别作为供试品溶液和对照品溶液。两个生产企业的供试品溶液色谱图分别见图3、图4。2.3方法学考察(1)线性范围精密称定呋苄西林对照品适量，用流动相分别稀释成0.0964、0.1929、0.964、1.929、9.64、19.29μg/ml的溶液

6、，记录色谱峰面积，将所得呋苄西林峰峰面积与进样量作线性回归，得回归方程为：A=1523.9C+79.045r=0.9999图1甲企业有关物质色谱图(呋苄西林保留时间为13.651min)图2乙企业有关物质色谱图(呋苄西林保留时间为13.661min)图3甲企业含量测定的供试品溶液色谱图图4乙企业含量测定的供试品溶液色谱图(下转第767页)(上接第页)提示在0.0964μg～19.29μg的范围内，进样量与峰面积的线性关系良好。(2)方法精密度取某一批供试品共6份，分别进样，所得峰面积的相对标准偏差为0.03%。(3)最低检测限以信噪比为3，所得

7、最低检出限为1.2ng。(4)耐用性考察采用三根不同品牌的色谱柱，(a)大连依利特公司HypersilBDSC18(4.6mm×250mm，5μm)；(b)TSK公司TSKGelODS100S(4.6mm×150mm，5μm)；(c)Merck公司Lichrosper100RP18e(4.0mm×250mm，5μm)，三根色谱柱均可将呋苄西林及有关物质良好分离。本文图谱均采用Merck柱的色谱图。3讨论(1)流动相中缓冲液pH值的选择根据磷酸盐的pKa值，本文分别选择了pH7.0、pH5.0和pH3.5的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液∶

8、乙腈(75∶25)为流动相。试验发现，随着流动相中缓冲液pH值的降低，呋苄西林峰的保留时间增加，主峰与相邻杂质峰的分离度增加。并且当缓冲液pH值为3.