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《2007产甘油假丝酵母两种转化方法的比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第3期食品与生物技术学报Vol.26No.32007年5月JournalofFoodScienceandBiotechnologyMay.2007文章编号:167321689(2007)0320070205产甘油假丝酵母两种转化方法的比较张永光,陈献忠,饶志明,沈微,方慧英,诸葛健(江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122)摘要:为了研究产甘油假丝酵母高产甘油和耐高渗的机制,以Zeocin作为选择标记,考察和比较了两种转化方法,即醋酸锂法和电转化法的转化效果,以
2、建立简单有效的产甘油假丝酵母转化体系。结果表明,细胞生长时期是影响转化率的关键因素。在OD600约为1.3时制备感受态细胞,在电压为115kV时进行电击,可获得较高转化率,为每微克DNA139个转化子。在OD600约为110时制备感受态细胞,醋酸锂预处理细胞1h,获得的转化率为每微克DNA154个转化子。综合考虑,醋酸锂法更适合于产甘油假丝酵母的转化。关键词:产甘油假丝酵母;转化;醋酸锂中图分类号:Q933文献标识码:AComparisonofTwoTransformationMethodsforCa
3、ndidaglycerinogenesZHANGYong2guang,CHENXian2zhong,RAOZhi2ming,SHENWei,FANGHui2ying,ZHUGEJian(KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyofMinistryofEducation,SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversi2ty,Wuxi214122,China)Abstract:Inordertodevelopahighefficiencyg
4、enetictransformationsystemforCandidaglycerinogenes,twodifferenttransformationmethods(lithiumacetateandelectroporationtransformation)werecomparedinthisstudy.Itwasfoundthatthecellgrowthstageplayskeyroleonthetransformationefficiency.UndertheconditionofOD66
5、0=1.3,voltageof115kV,ahightransformationefficiency(139tansformants/μgDNA)wasachieved.However,withthelithiumacetatetransformationmethod,154tansformants/μgDNAwasdetectedundertheconditionsofOD660=110,1hLiActreatment.Allresultsdemonstratedthat,LiActransform
6、ationmethodwillbebeneficialtodevelopthegenetictransformationsystemforCandidaglycerinogenes.Keywords:Candidaglycerinogenes;transformation;lithiumacetate[1-2]产甘油假丝酵母Candidaglycerinogenes是目产量、高转化率等优点。转化是酵母基因操作前我国用于发酵甘油生产的主要优良菌株,具有高技术的重要前提,高效的酵母转化体系是实现外源收稿日
7、期:2006210226.基金项目:国家自然科学基金项目(30570142),江苏省青年科技创新人才基金项目(BK2006504).作者简介:张永光(19762),男,河南三门峡人,发酵工程博士研究生.通讯作者:诸葛健(19392),男,浙江金华人,教授,博导,主要从事工业微生物菌种选育及其相关研究.Email:jzhuge@hotmail.com第3期张永光等:产甘油假丝酵母两种转化方法的比较71基因表达的关键之一,也是深入研究酵母遗传资源受态细胞和1μg质粒混匀后,移入预冷的2mm规和进行途径工程
8、改造的基础。最早使用的酵母转格电击杯中。设定电阻200Ω、电容25μF不变,进化方法是原生质体法,随后有LiAc法、电转化法、行电击。迅速加入0.9mL预冷的1mol/L山梨醇[3]粒子轰击法、玻璃珠振荡法等。转化方法的选择轻柔悬浮细胞,30℃静置培养1h。加入1mL液取决于试验的目的,通常以转化率,即每微克DNA体YPD,于30℃、100r/min下培养1h。浓缩培养转化时所获得的转化子个数(转化子个数/(μg液,将其均匀涂布选择培养基。30℃避光培养
