雷蒙德氏棉3条染色体特异bac的筛选与定位

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1、棉花学报CottonScience2013袁25渊4冤院323~328雷蒙德氏棉3条染色体特异BAC的筛选与定位1121111*覃琴袁刘方袁甘仪梅袁王春英袁王玉红袁蔡小彦袁王坤波渊1.中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室袁河南安阳455000曰2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物遗传资源重点实验室袁海南海口571101冤摘要院通过筛选海岛棉BAC文库并结合BAC-FISH技术成功获得雷蒙德氏棉D501尧D502和D510染色体的特异BAC克隆袁可作为这3条染色体的细胞学标记遥这3个克隆在雷蒙德氏棉和海岛棉中进行比较作图袁结果表明袁它们在海岛棉中均表

2、现出了染色体特异性袁说明这3个BAC也可用于海岛棉Db01尧Db02和Db10染色体的识别遥其中BAC克隆280G06在两棉种10号染色体上的位置为非线性关系袁可能在棉属的进化过程中发生了染色体结构的变异遥关键词院雷蒙德氏棉曰单染色体曰细菌人工染色体曰荧光原位杂交中图分类号院S562.035.3文献标志码院A文章编号院1002-7807渊2013冤04-0323-061121111*QINQin,LIUFang,GANYi-mei,WANGChun-ying,WANGYu-hong,CAIXiao-yan,WANGkun-bo(1.455000,;2.571101,)Wescreene

3、dabacterialartificialchromosome(BAC)libraryofacc.Pima90-53toidentifychromosome-specificBACclones.UsingBAC-fluorescencehybridizationtechnology,weobtainedthreeBACclonesspecifictochromosomeD501,D502,andD510of,whichcouldbeusedascytologicalmarkersforthosethreechromosomes.Comparativemappingofthesethre

4、eBACsbetweenandinshowedthatthesethreeBACclonescouldalsobeusedtoidentifychromosomesDb01,Db02,andDb10inThepositionoftheBACclone280G06onchromosome10didnotshowcolinearitybetweenand,possiblybecauseofchro-mosomalrearrangement.individualchromosome;bacterialartificialchromosome(BAC);Fluorescencehybridiz

5、ation(FISH)棉属有52个种袁其中包括5个四倍体种和雷蒙德氏棉的研究有助于深入了解异源四倍体47个二倍体种遥根据不同棉种杂交F1减数分裂棉种的进化及AD亚组的相互关系遥时染色体的配对关系袁二倍体种可分为8个基因经典细胞遗传学识别染色体的方法主要是[1]组类型袁分别是A-G和K基因组袁其单倍体基通过分析染色体的相对长度尧臂比和随体的特征因组大小在880Mb渊D基因组雷蒙德氏棉渊等来实现的遥就棉花而言袁其染色体小袁形态相袁D5冤冤～2460Mb渊K基因组小小棉渊似袁着丝点不易分辨曰同时在预处理过程中因所[2]袁K1冤冤范围内袁可见雷蒙德氏棉是棉属用试剂和处理时间的差异袁使得染色体的

6、缩短程中基因组最小的棉种遥多数观点支持雷蒙德氏棉度不同袁因此依靠染色体形态来确定染色体编[3]与异源四倍体棉种D亚组的亲缘关系最近袁对号袁不同学者之间仍存在分歧遥荧光原位杂交收稿日期院2013-03-07作者简介院覃琴(1986-)袁女袁硕士研究生袁qinqin36@163.com曰通讯作者袁wkbcri@163.com基金项目院国家863计划(2012AA101108-02-05)曰农业部保种项目(NB2012-2130135-29B)曰农业部948项目(2011-G1-04)324棉花学报25卷渊Fluorescencehybridization袁FISH冤始于20标记需要在雷蒙德

7、氏棉基因组DNA中进行扩世纪60年代末袁最初使用的探针类型为DNA重增袁其具体PCR渊Polymerasechainreaction冤反应[4][17]复序列和多拷贝基因家族遥随着FISH技术的不体系尧反应程序和电泳检测参见Zhang等进行遥[5]断发展袁逐渐开始使用单低拷贝序列作为探针袁BAC文库的筛选但此类序列片段短袁存在不易与靶染色体结合且所用的BAC文库为海岛棉Pima90-53BAC检出信号较困难等问题遥BAC-FISH是采用植物文库