光皮桦bbx类基因blcol13的克隆与表达分析

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1、园艺学报，2015，42(7)：1367–1377.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0208；http：//www.ahs.ac.cn1367光皮桦BBX类基因BlCOL13的克隆与表达分析*窦锦青，程龙军，徐凤华，张俊红，童再康（浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安311300）摘要：利用RACE、RT-PCR以及基因组步移技术克隆得到光皮桦BlCOL13全长cDNA（GenBank登录号：KP663425）、全长DNA及其启动子序列。该基因DNA全长2808bp，具有4个外显

2、子，3个内含子；cDNA全长1370bp，包含1140bp的开放阅读框，编码含379个氨基酸的蛋白。BlCOL13蛋白N、C端分别有两个B-box和一个CCT结构域，属于典型的BBX蛋白。以拟南芥中BBX蛋白的分类为参照，通过聚类分析表明BlCOL13属于Ⅱ型BBX蛋白；克隆得到的BlCOL13启动子序列长685bp，含有多个与成花、光响应、激素信号转导以及逆境胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位试验结果表明该基因主要在细胞核中表达。不同组织中该基因都有一定程度的表达，但在雄花中表达量最高。低温、干旱、ABA和盐胁迫等非生物逆境都在一定程度上诱导BlCOL13的表达，盐胁迫的影响最为明

3、显，表明该基因在光皮桦逆境响应中可能发挥比较重要的作用。关键词：光皮桦；Betulaluminifera；BlCOL13；BBX；基因克隆；表达分析中图分类号：S68文献标志码：A文章编号：0513-353X（2015）07-1367-11CloningandExpressionAnalysisofaB-box-typeProteinGeneBlCOL13inBetulaluminifera*DOUJin-qing，CHENGLong-jun，XUFeng-hua，ZHANGJun-hong，andTONGZai-kang（TheNurturingStationoftheStatek

4、eyLaboratoryofSubtropicalSilvicultrue，ZhejiangA&FUniversity，Lin’an，Zhejiang311300，China）Abstract：Thefull-lengthcDNA，genomicDNAandpromotersequenceofBlCOL13wereclonedfromBetulaluminiferawithRACE，RT-PCRandGenomeWalkingmethodsrespectively.BlCOL13genomicDNAwas2808bpcontaining4exonsand3introns，andits

5、cDNAwas1370bpencodingaproteinof379aminacids.TheBlCOL13proteincontained2B-boxdomainsatNterminusand1CCTdomainsatCterminuswhichwasclassifiedintoBBXproteins.BasingontheclassificationrulesofBBXinArabidopsis，BlCOL13belongstotypeⅡBBX.Thereareseveralcis-elementsrelatedwithflowering，light-response，hormo

6、nesignaltransductionandstressresponseinthepromoterofBlCOL13whichwas685bp.NuclearlocalizationwithBlCOL13mergedproteinwithGFPimpliedBlCOL13mainlylocatedinthenucleus.BlCOL13allexpressedinrootsstems，leaves，maleandfemaleflowers，buthighlyinmaleflowers.qRT-PCRresultofBlCOL13underlowtemperature，drought

7、，ABAandsalttreatmentsrevealeditwasinducedbytheseabioticstresscondition，especiallyforthesalttreatment，implyingBlCOL13possibly收稿日期：2015–04–28；修回日期：2015–06–11基金项目：浙江省农业新品种育种重大专项项目（2012C12908-8）；国家自然科学基金项目（31300566）*通信作者Authorforcorre