光皮桦成花相关spl基因的克隆、表达及功能分析

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1、．！分＊号？參密级不保街ＸＪＤＣ６３０硕王学位论文光皮枠成花相关乂ＰＺ基因的克隆、表达及功能分析作者蚀名；牛明月指导教师；林二培副教授学科专业名称；林木遗传育种研究方向：林业生物技术巧在学院；林业与生物技术学院‘论文提巧日期：２０１５年６月８ＨＩ浙江农林大学Ｉ＆２０１５年６月８日ｍ諭独创性声明＂，是本人声明，所呈交的学位论文受浙江省基金光皮枠基因功能与序列变＂且是异研究的资助在指导教师指导下，通过

2、我的努力取得的成果，并自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中己经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书一而使用过的材料同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并。与我，由本人承担应有的责任。表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为：碎蘭匀日期：必取读．巧学位论文作者亲笔签名．论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论＾许论文被查阅和

3、借阅，可；学校可Ｗ公布论文的全部或部分内容心采文的复印件，允用影印。、缩印或其他复制手段保存论文保密，在＿＿年后解密可适用本授权书。□＾不保密，本学位论文属＂于不保密。曰Ｖ＂（请在方框内打）‘学位论文作者亲笔签名；斗蜗巧曰期：Ｘｆｅ＇Ｇ靖指导教师亲笔签名：？之碱日期：耐ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterCloning，ExpressionandFunctionalanalysisofFloweri

4、ngrelatedSPLgeneinBetulaluminiferaCandiadate:NIUMing-yueAdviser:LINEr-pei,AssociateprofessorSpeciality:GeneticsandBreedingofForestTreesDateofSubmission:May22,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaJune，2015摘要摘要SBP-box基因家族是植物特有的一个转录因子基因

5、家族，广泛存在于绿色植物中，在成花过程中起关键的调控作用。本研究以珍贵用材树种光皮桦为材料，采用RACE的方法，克隆获得光皮桦的13个SPL基因，通过生物信息学、亚细胞定位、荧光定量PCR分析和酵母双杂交等手段，对其进行了功能分析，获得以下主要结果。1.序列分析结果显示，BlSPL5的ORF最长，达到3249bp，编码1082个氨基酸；BlSPL3的ORF最短，仅为450bp，编码149个氨基酸；在这些光皮桦SPL转录因子的N端均具有一个保守的SBP结构域，仅在BlSPL4、BlSPL5和BlSPL12

6、的C端含有一个较保守的ANK结构域。系统进化分析结果显示，这13个BlSPLs分别属于陆地植物SPL基因的8个不同分支。2.采用RLM-RACE的方法，对BlSPL1、3、6、7、8、9和11的miR156/157剪切位点进行了验证。结果显示，除BlSPL8的剪切位点在miR156/157的11/12位外，其余BlSPLs的剪切位点均在10/11位，说明它们的剪切模式有比较强的一致性；而在剪切发生的位点，除BlSPL9外其余SPL基因均有1个碱基miR156/157错配。3.利用洋葱表皮细胞对部分BlS

7、PL基因进行了亚细胞定位分析，结果显示，miR156靶标的BlSPL1和3均定位于细胞核，符合转录因子的定位特征。4.荧光定量PCR分析结果表明，BlSPL1、2、5、11、13在雄花序中高表达，推测它们与成花相关；miR156及其靶标的BlSPLs基因在不同年龄植株中的表达呈明显负相关，表明该途径可能是光皮桦童期转换的重要途径。5.酵母双杂交结果显示，BlSPL1、5、13与BlDELL蛋白有互作，结合表达相关性分析，说明这些功能复合体可能共同参与GA介导的成花途径。关键词：SPL，miR156，开花

8、，光皮桦，表达分析。IABSTRACTABSTRACTAsaspecifictranscriptionfactorfamilyinplant,SBP-boxplayscriticalrolesinregulationoffloraldevelopment.Inthisstudy,thirteenSPLgeneswereisolatedfromaprecioustimbertreeBetulaluminiferathroughRACEstra