_叶片中烯脂酰_coa还原酶基因psecr的筛选及其启动子的克隆表达分析

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1、果树学报2014，31（4）:574～582JournalofFruitScienceDOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20140030叶片中烯脂酰-CoA还原酶基因PsECR的筛选及其启动子的克隆表达分析1，21，2*1，211，23赵利，陈桂信，王玉珍，吕恃衡，潘东明，姜翠翠（1福建农林大学园艺学院，福州350002；2福建农林大学园艺产品贮运保鲜研究所，福州350002；3福建省农业科学院果树研究所，福州350013）摘要：【目的】探讨ECR基因在调控蜡质形成过程中分子机制及其启动

2、子的克隆和功能，为其抗病机理研究和基因表达调控模式研究奠定基础。【方法】从已构建好的5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库中分离得到了一个烯脂酰-CoA还原酶（ECR）基因，命名为PsECR，然后，根据其序列设计引物，采用GenomeWalking方法从基因组DNA中分离获得PsECR基因上游的启动子序列，命名为PsECRp。【结果】PsECR序列分析结果表明，该基因的cDNA全长为1717bp，5′非翻译区长447bp，3’非翻译区长337bp，开放阅读框（ORF）为933bp，编码311个

3、氨基酸。通过蛋白质序列对比发现PsECR与蔷薇科植物苹果的ECR蛋白质同源性达到93%，荧光定量PCR分析表明，PsECR在幼叶、老叶中的表达量相对其他3个时期明显最低，而叶芽、展开叶、成熟叶中表达量处于同一水平。将得到的PsECRp序列用在线软件plantcare和plant分析表明，该序列除含有启动基本元件，如TATA-Box、CAAT-Box外，还含有2个防御相关元件（MYB1LEPR）、2个抗病响应元件（BIHD10S）、1个病原菌应答元件（W-Box）、1个真菌诱导反应元件（Box-w1）、2

4、个茉莉酸甲酯响应元件（CGTCA-motif）、1个响应逆境胁迫富TC的重复序列（TC-richrepeats）等响应元件。【结论】筛选得到了PsECR基因全长序列，对该基因在叶片的不同生长发育过程中的动态表达分析显示，PsECR基因可能参与叶片蜡质合成的调控。由获得的PsECRp启动子的序列分析表明，可以推测E-CR在植物应答抵抗病原菌和逆境胁迫方面起着非常重要的作用。关键词：（PrunussalicinaLindl.var.cordataJ.Y.Zhangetal.）；全长cDNA；启动子；调控元件

5、；基因表达分析；序列分析中图分类号：S661．1文献标志码：A文章编号：1009－9980(2014)04－0574－09Isolationoffull-lengthcDNAofECRanditspromoterfromNai’s（Prunussalicina）leafanditsexpression1，21，2*1，211，23ZHAOLi，CHENGui-xin，WANGYu-zhen，L譈Shi-heng，PANDong-ming，JIANGCui-cui（1CollegeofHorticultu

6、re2，FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002China；InstituteofStorageScienceandTech-nologyofHorticulturalProducts3Fruit，CollegeofHorticulture，FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002China；ResearchInstitute，FujianAcademy

7、ofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350013China）Abstract:【Objective】VLCFAprecursorsforcuticularwaxproductionaresynthesizedintheepidermalcellsbythemultienzymefattyacidelongase(FAE)complexfoundontheER.ECRisusedforthecatalyticreductionreactionofthelaststept

8、hefattyacidextensionreaction，thenlayfoundationforfurtherstudyontheregulationmechanismofwaxbiosynthesis.Thestudyonthepromotercloninganditsfunctionalinves-tigationcontributetotheunderstandingofdiseaseresistancemechanismandge