洋葱acchsa与acans基因启动子的克隆与表达分析

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1、万方数据。’。’‘and·13"ofthqcloningandexpressionanalysisofthepromotersofonionAcChsAandAcANSgenesr一‘·olhCSlSsubmittedtoQngdaoAgmulturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementf6rtheDegreeof—MasterofAgronomy，一一LiuChang(DepartmentofHorticulture)Supervisor：WangFuWuXiongMiaoJunQingdao．ChinaJ

2、une，2013万方数据学位论文独创性声明iIIIIlllJllllllllllliJIIIIY2663594本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：匈畅签字日期：≯疗年舌月f歹日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，

3、允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：刻坤勿签字日期：2口房年占月15日导师签字：歹豸签字日期：幽I≥年6月，罗日万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要洋葱AcChsAAcANS基因启动子的克隆与表达分析摘要洋葱(AlliumcepaL．)是百合科葱属二年生草本植物，可鲜食，可加工，营养丰富，有着“蔬菜皇后”的美誉。洋葱的皮色是其外观品质的重要组成部分，花青素的积累对洋葱的皮色起着决定作用，其生物

4、合成及调控途径一直是研究的热点。其中大量相关的关键酶基因已被克隆鉴定，但是在洋葱中的研究还比较有限。查尔酮合成酶(CHS)是花青素合成中的第一个关键酶，而花青素合成酶(ANS)位于花青素合成通路的倒数第二步，催化了无色花色素向有色花色素转化的关键酶。本研究对上述两个关键酶基因的上游调控序列进行了克隆，将启动子序列与含有GUS报告基因的植物表达载体进行融合，利用农杆菌介导的floral．dip法转化拟南芥，从而对启动子的活性进行研究。主要结果如下：1．获得洋葱查尔酮合成酶基因(AcCHS)启动子片段。以洋葱鳞茎为材料提取DNA，根据本课题组前期克隆的查尔

5、酮合成酶基因(CHS)启动子序列设计引物，通过PCR扩增获得长度分别为1．5kb和1．2kb的上游调控序列，命名为ChsAPMl、Ch娶APM2。2．获得洋葱花青素合成酶基因(AcANS)启动子片段。以洋葱基因组DNA为模板，设计特异性引物进行PCR扩增，获得分别为1．8kb和2．2kb的上游调控序列，命名为ANSPMl、ANSPM2。经克隆测序，与GenBank上已发表的ANS基因启动子同源性均达到99％(登录号：EFl92598．1、EFl92475．1)，证实克隆到的确实为AcANS基因启动子序列。3．对获得的四个启动子序列进行预测分析，除了具备

6、TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件，还含有许多如G．box、I-box、ABRE、TCA-element等参与光响应、水分应答、激素应答、逆境应答的顺式作用元件。4．用克隆到的启动子片段代替CaMV35S启动子，构建含有GUS报告基因的植物表达载体，利用洋葱表皮进行GUS瞬时表达实验，判断四个启动子均具备启动活性。5．利用农杆菌介导的floral-dip法转化拟南芥，分别得到若干株转基因拟南芥，结合组织化学染色法，检测G嬲报告基因的表达，结果表明启动子ChsAPMl在花、叶、根部均有表达，而启动子ChsAPM2、ANSPMl、ANSPM

7、2均未见表达。关键词：洋葱；花青素合成酶基因；查尔酮合成酶基因；启动子；克隆万方数据青岛农业大学硕士学位论文AbstractCloningandexpressionanalysisofthepromotersofonionAcChsAandAcANSgenesAbstractOnion(AlliumcepaL．)，aherbaceousbiennial，cannotonlybeeatenfleshbutalsoprocessed．It’Srichinnutrition,andithasagoodreputationwith”Queenofvegetab

8、les”inEurope．Inonions，bulbcolorisamajortraitinb