论苹果渣多酚抗氧化性质

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1、论苹果渣多酚抗氧化性质　　摘要：为研究苹果渣多酚的抗氧化性质，分别测定了苹果渣多酚对·OH的清除作用、对·O2-的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用。结果表明：苹果渣多酚提取物对·OH的清除能力、对·O2-的清除能力和脂质过氧化的抑制能力EC50分别为5.7mg/ml、6.7mg/ml和0.27mg/ml。苹果渣多酚提取物具有较强的抗氧化的作用。关键词：苹果渣；多酚；抗氧化 　　作者简介：靳学远，学士，安徽淮南人，副教授，从事天然产物化学研究和教学。 　　苹果中含有丰富的植物纤维、糖、矿物质、苹果酸、维生素、蛋白质和多酚类物质

2、。苹果多酚(applepolyphenols，缩写为AP)是苹果中所含多元酚类物质的总称，在一些酿酒苹果品种中最高可达7g/kg(鲜重)[1]。研究发现，苹果多酚的许多生理功能活性比茶多酚要高100倍以上[2]，具有防衰老、抗肿瘤、抗突变、抗动脉粥样硬化、防治冠心病与中风等在内的多种药理功能[3]。日本从未成熟的苹果中已开发出苹果多酚制品，我国的苹果资源丰富，然而其综合利用还较落后，苹果渣是果汁厂榨汁后产生的下脚料，含有多丰富的多酚类化合物，但长期以来，果汁厂将其作为废渣抛弃，造成了环境的极大污染和资源的严重浪费。作者采用苹

3、果渣提取了其中的多酚物质，对其抗氧化活性进行研究。 1材料与方法 1.1材料和设备 　　苹果渣为安徽萧县龙城食品厂提供；无水乙醇、氯仿、乙酸乙酯等为分析纯，原儿茶酸、三氯乙酸(TCA)、硫代巴比妥酸(TBA)为Sigma公司产品。 　　WD2900B格兰氏微波炉(中国顺德格兰氏电器公司)，751-GD紫外可见光分光光度计(上海分析仪器总厂)，旋转蒸发器,SHZ-C型循环水式多用真空泵(河南省巩义市英峪电子仪器厂生产),电子天平(日本岛津公司)。 1.2试验方法 1.2.1苹果渣多酚的微波提取 　　精确称取一定量的苹果渣放入烧

4、杯内。按比例加入70%乙醇溶液，然后把烧杯放入微波炉内，调节微波功率350W，按提取时间240s进行提取。提取完成后，取出烧杯慢慢搅拌，放置2-3min后，用真空泵将原料与溶剂减压抽滤分离，收集滤液，滤液用旋转蒸发器减压蒸馏回收乙醇，待乙醇基本除去后，加入一倍量的氯仿萃取，将下层(氯仿层)溶液在旋转蒸发器上回收氯仿，上层(水层)用3倍量的乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，加入无水MgSO4除去残留水分，然后将萃取液过滤，得到的滤液用旋转蒸发器在50～60℃下减压蒸馏回收乙酸乙酯。将回收乙酸乙酯后的萃取液放入真空干燥箱中，在小于7

5、0℃下干燥，除去残余的乙酸乙酯，得苹果渣多酚。 1.2.2多酚含量的测定 　　标准曲线的制作：配制100mg/L原儿茶酸标准溶液。分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml原儿茶酸标准溶液，加入1mlFolin-酚显色剂、5ml1mol/L碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10ml，混合均匀后，室温下避光放置1h，用UV-754紫外可见光分光光度计在760nm处测定吸光值。以吸光值进行线性回归分析，求得回归方程和相关系数分别为A=0.0723C-0.0092r=0.998(P 　　样品中多酚含量的测定：准确称取4

6、0mg苹果渣多酚化合物固体提取物，用蒸馏水溶解并定容至5ml，取1ml按标准曲线制作方法测定吸光值，计算多酚含量。 1.2.3苹果渣多酚对·OH的清除作用 　　采用Fenton反应体系，·OH由EDTA-Na2-Fe(Ⅱ)-H2O2产生，由于·OH可特异性地使番红花红T褪色，根据褪色程度用比色法来衡量·OH的含量。反应体系含pH7.4磷酸盐缓冲液1.5ml，260μg/ml番红花红T0.2ml，3%H2O20.8ml，2mmol/LEDTA-Na2-Fe(Ⅱ)0.7ml，再加入不同浓度的供试液0.8ml，混匀后于37℃保温3

7、0min，然后于520nm处测定A值。空白组以重蒸水代替供试液，对照组以重蒸水代替供试液和EDTA-Na2-Fe(Ⅱ)，每个浓度组平行测定5份，求其平均值。实验结果以抑制率表示。 1.2.4苹果渣多酚对·O2-的清除作用 　　采用邻苯三酚自氧化法。具体操作是pH8.2的Tis-HCI缓冲液加0.1ml不同浓度的PRL,混匀后加入7mmol/L的邻苯酚0.3m1,混匀后在第4min时加入10mol/LHCI1滴中止反应，在325nm波长下测A值，计算抑制率。 　　1.2.5苹果渣多酚对自发脂质过氧化的抑制作用 　　选用18~2

8、5g雄性小鼠，饥饿过夜，颈椎脱臼处死，迅速取出肝脏放入冰浴的PBS缓冲液中，洗净剪碎，然后加入4℃PBS缓冲液进行匀浆，制成10%的肝匀浆，取0.6ml于试管中，加入不同浓度供试液1.0ml，对照组以蒸馏水代替供试液，混匀后于37℃水浴温孵2h，取出后加10%三氯乙酸2.0ml，0.67%