灰黄霉素片微生物限度检查方法研究

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1、内蒙古医科大学毕业论文题目灰黄霉素片微生物限度检查方法研究学生姓名邢丽霞闫冠男学号200809011021200809013006院系药学院专业中药学药物制剂指导教师崔晶华高艳波二Ｏ一二年五月二十日10目录1.中文摘要…………………………………………………………………………32.前言………………………………………………………………………33.仪器与材料…………………………………………………………………34.验证方法与结果…………………………………………………………………45.讨论……………………………………………………………………76.参考文献………

2、……………………………………………………………87.致谢…………………………………………………………………………98.英文摘要…………………………………………………………………………1010灰黄霉素片微生物限度检查方法研究邢丽霞闫冠男内蒙古医学院中药学专业、药物制剂专业，呼和浩特010059摘要：目的：建立灰黄霉素片的微生物限度检查方法。方法：采用五种阳性对照菌进行回收率试验，确定供试品的抑菌情况，从而选择消除方法。结果：本品对霉菌和酵母菌有抑菌作用，需采用薄膜过滤法才能消除其抑菌作用，回收率均可达70%以上。结论：蒙欣生产的灰黄霉素片采用平皿法检查

3、细菌数，薄膜过滤法检查霉菌和酵母菌数，常规法检查控制菌数。关键词：灰黄霉素片；微生物限度；抑菌作用前言根据《中国药典》2010年版二部规定，所有非规定灭菌制剂及其原料、辅料，在建立其微生物限度检查法之前，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法是否适合于该制剂的细菌、霉菌及酵母菌数的测定和控制菌检查方法［１］。因此我们对蒙欣药业生产的灰黄霉素片微生物限度检查法进行了验证试验的研究，建立了灰黄霉素片的微生物限度检查方法。具体如下。1仪器与材料1.1仪器净化工作台、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器1.2培养基营养琼脂培养基（批

4、号：081212）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号：0810303）、营养肉汤（批号：081164）、改良马丁培养基（批号：0810093）、胆盐乳糖增菌液（批号：081209）、稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：0812043）、4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（MUG）（批号：081119），均购于北京三药科技开发公司。以上批号培养基在购入时均进行了适用性检查，符合规定。1.3药品灰黄霉素片（111001、111002、111003）规格：0.1g101.4菌株大肠埃希菌(Eschrichiacoli)[CMCC(B)44102]；枯草芽孢

5、菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]；金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]；白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]；黑曲霉(Aspergspergillusniger)[CMCC(F)98003]均购于中国食品药品检定研究院医学菌种保藏中心。2验证方法与结果2.1菌液制备2.1.1细菌、霉菌及酵母菌的检查的菌液制备2.1.1.1取新鲜的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的培养物至营养肉汤培养基中，经32℃培养24h，用0.9％无菌氯

6、化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.1.2取新鲜的白色念珠菌的培养物至改良马丁培养基中，经25℃培养48h，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.1.3取新鲜的黑曲霉培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基，经25℃培养7d，加入4ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将霉菌孢子洗脱。然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化

7、钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.2控制菌的检查菌液的制备取新鲜的大肠埃希菌的培养物至营养肉汤培养基中，经32℃培养24h，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含细菌数约为10～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.3供试品制备取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成1：10的供试液。2.2验证试验方法细菌、霉菌及酵母菌检验方法验证采用上述供试品，进行3次平行试验，分别人工污染上述5种代表试验菌株。控制菌检验方法验证采用上述供试品进行实验。2.2.1细菌、霉菌及酵母菌的

8、计数方法验证试验2.2.1.1验证试验操作102.2.1.1.1试验组：分别取1ml供试液加入平皿中，再分别