复方丹参片微生物限度检查方法学探究

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1、复方丹参片微生物限度检查方法学探究【摘要】目的探索适合复方丹参片微生物限度检查方法，消除复方丹参片的微生物限度检查法中的抑菌作用。方法本文采用培养基稀释法与薄膜过滤法对细菌、霉菌和酵母菌进行试验，加试验菌回收并且计算回收率。结果薄膜过滤法回收率达到70%以上。结论可用薄膜过滤法对复方丹参片进行微生物限度检查。【关键词】复方丹参片；微生物限度检查；方法学复方丹参片属于中药复方制剂，临床用于心绞痛（冠心病）、高血压、颈椎病以及胸中憋闷等病症，处方中丹参和冰片两种中药材，均含有抑菌物质，对某些细菌的生长繁殖有一定的抑制作用，常规法和培养

2、基稀释法不能有效检出该药品污染存活的细菌数量，结果不能准确反映该药品品种的微生物质量。根据《中国药典》2010年版二部附录微生物限度检查法的规定[1],参照近年来相关文献[2],本文对该品种的微生物限度检查方法进行了方法学研究，通过研究，采用薄膜过滤法，可以消除药品中抑菌成分的干扰，准确检出药品中污染存活的细菌数量。1仪器与材料1.1仪器LS-B50L立式灭菌锅；JJ200电子天平；JT-B电动匀浆仪；MJX-250B-Z霉菌培养箱；SPX-250B-Z生化培养箱；ZSD-A1160生化培养箱；格兰仕微波炉；BJ-2cD净化工作台

3、；AC2-4S1ESCO生物安全柜。1.2培养基营养琼脂培养基批号：100408；玫瑰红钠培养基批号：100921；营养肉汤培养基批号：110406；胆盐乳糖增菌液批号：110121；MUG培养基批号:111012；PH7.0氯化钠蛋白腺缓冲液批号：100603；曙红亚甲蓝琼脂培养基批号：1011222生产单位：北京三药科技开发公司。1.3验证用菌种大肠埃希菌［CMCC(B)44102］；枯草芽胞杆菌［CMCC(B)63501］;金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］；白色念珠菌［CMCC(F)98001］；黑曲霉菌［CMCC

4、(F)98003］来源：中国食品药品检定研究院。1.4菌液制备取经351培养18〜24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽胞杆菌肉汤液体培养物0.1ml加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-4〜10.-6约为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。取经25°C培养18〜24h的白色念珠菌液体培养物0.1ml加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-4〜10.-6约为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。取经培养一周的黑曲霉斜面培养物，加0.9%氯化钠溶液3ml,洗下霉菌胞子，取0.1ml加入9ml0

5、.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-5〜10.-7约为50〜100cfu/ml，做活菌计数备用。2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证2.1供试液制备取本品10g置锥形瓶中，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液100ml,以4000转/分开机1分,即为1：10的供试液。2.2回收率测定2.2.1供试品对照组①培养基稀释法：取1:10的供试液2份，每份1ml分别注入5个平皿中，倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基各约15ml,点计菌落数。②薄膜过滤法：取供试液1ml过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液冲洗滤膜2次，每次10

6、0ml,取出滤膜菌面朝上贴于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基平板上，测定供试品本底的菌数。结果见表1。2.2.2试验组取供试液1ml按供试品对照组同法操作，同时加入50〜100cfu相应试验菌1ml,置规定温度培养，观察结果并计数，结果见表1。2.2.3菌液组分别取菌液1ml,注入平皿中倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养，观察结果，测定所加入的试验菌数，结果见表1。2.2.4稀释剂对照组取1ml稀释液代替供试液，加入50〜100cfu相应试验菌1ml,置规定温度培养，观察结果并计数，结果见表1。2.3结果