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1、维C银翘片微生物限度检查方法建立及探究【摘要】:目的:建立维C银翘片微生物限度检查方法｡方法:按《中国药典》2005版的要求[1],通过接种代表性的阳性菌株,用常规法､稀释法及薄膜过滤法对五株阳性菌株进行回收率测定｡结果:该样品具有一定的抑菌活性,用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液每筒冲洗400mL(分四次),可以消除样品的抑菌活性作用｡结论:本样品细菌数需采用薄膜过滤法进行测定､霉菌数和酵母菌数可采用稀释法进行测定､控制菌大肠埃希菌采用常规法法进行检查｡【关键词】
2、:维C银翘片 微生物限度检查 回收率 冲洗量 方法学验证【中图分类号】R286.0【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2008)07-0044-027维C银翘片具有辛凉解表,清热解毒的功能[2]｡临床用于流行性感冒引起的发热头痛､咳嗽､口干､咽喉疼痛｡当建立药品的微生物限度检查法时,应进行方法的验证,以确认所采用的方法适合于该药品的细菌､霉菌及酵母菌数的测定及控制菌检查[3]｡本文通过接种代表性的五株阳性菌株,采用常规法､稀释法ʍ
3、80;薄膜过滤法进行微生物限度检查方法学验证实验,为该样品建立了微生物限度检查方法｡1仪器与材料1.1仪器HTY-2000A集菌仪(杭州高得医疗器械有限公司);开放式集菌器(北京牛牛基因技术有限公司,批号:20051005)｡1.2样品维C银翘片(云南雄业制药有限公司,规格/片,批号050301050401050412)1.3培养基和试剂硫乙醇酸盐液体培养基(批号,040212),改良马丁液体培养基(批号,0507062),改良马丁琼脂培养基(批号,050520),玫瑰红钠琼脂培养基(批号,030710),营养肉汤培养基(批号,05
4、0508),营养琼脂培养基(批号,050328),胆盐乳糖增培养基(批号,0504192),北京三药科技开发公司｡1.4菌种大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(F)44102]､枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]､金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]､白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]､黑曲霉(Aspergillusniger)[CM�CC(F
5、)98003](中国药品生物制品检定所提供)72方法按中国药典2005版一部微生物限度检查法(附录XⅢC)[4]进行实验｡2.1菌液制备取经34℃培养18~24h,大肠埃希菌､金黄色葡萄球菌､枯草芽孢杆菌肉汤液体培养物1mL,加入9mL0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-5~10-7备用;取经24℃培养18~24h的白色念珠菌液体培养物1mL,加入9mL0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-6备用;取经培养一周的黑曲霉菌斜面物,加0.9%氯化钠溶液3mL,洗下孢子,转移至另一空管,标准比浊后,取1mL加入0.9%
6、氯化钠溶液中10倍稀释至10-4备用｡2.2菌液的检验取上述金黄色葡萄球菌､枯草杆菌､大肠埃希菌10-5~10-7稀释液各1ml,用45℃营养琼脂培养基20ml注皿,各平行测定两皿,30~35℃培养48小时,计数,应约为50~100cfu/ml;取上述白色念珠菌10-5~10-6稀释液及上述黑曲霉菌10-4孢子悬液各1ml,用45℃玫瑰红钠琼脂培养基20ml注皿,各平行测定两皿,23~28℃培养,逐日观察计数,应约为50~100cfu/ml｡结果见表1｡2.3供试液制备取样品10mg,加pH
7、7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,用匀浆议混匀,作为1:10的供试液｡2.4回收率的测定72.4.1细菌数霉菌数常规法测定试验组:取1:10供试液1ml､50~100cfu试验菌同时加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72小时逐日观察结果｡菌液组:测定每一菌株所加的试验菌数(同菌液检验)｡供试品对照组:取1:10供试液1ml加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72小时逐日观察结果,测定供试品本底菌数2.4.2细菌数霉菌数稀释法测定试验组:取1:1
8、0供试液0.2ml/皿､
