复方鲜竹沥液微生物限度检查法的方法学研究试验资料

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1、复方鲜竹沥液微生物限度检查法的方法学研究试验资料脑心舒口服液微生物限度检杳法的方法学研究实验资料1目的对供试品进行微生物限度检杳时，确认所采川的细菌、後菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法是否适合于该药品的微4：物限度检查。本试验依据《中国药典》2010年版一部附录XI【IC对英进行了微生物限度检查法的研究并验证，建立了该品种的微生物限度检查的方法。2样品：脑心舒II服液批号：规格：生产单位：3实验仪器：高压蒸汽立式灭菌器LMQ.C山东新华医疗器械公司微波炉SANYOEM-3—11EB1合肥荣事达三洋电器股份有限公司电子天平SartoriusBP211

2、4北京赛多利斯仪器系统有限公司净化工作台JB-CJ-2FQ苏州佳宝净化工程设备有限公司生物安全柜BIIC-1300IIA2苏州安泰空气技术有限公司细菌培养箱DG-1上海医疗器械修理厂霉菌培养箱MJX-250C上海博迅实业有限公司页疗设备厂集菌仪HTY-2000B杭州高德页疗器械有限公司一次性使用薄膜过滤器4培养基胆盐乳糖发酵培养基批号：20091018胆盐乳糖培养基批号：20090908玫瑰红钠琼脂培养基批号：20090405营养琼脂培养棊批号：090315营养肉汤培养基批号：091012改良马丁液体培养基批号：090608改良马丁琼脂培养基批号：0

3、91006曙红亚甲蓝琼脂培养基批号：0810015菌种枯草杆菌(Bac订lussubt订is)[CMCC(B)63501]金黄色匍萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]口色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]16菌液制备6.1取上述经35°C培养18-24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、人肠埃希菌的新鲜营养肉汤培养物lml,用0.9%无

4、菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5-10-7,约为50-100cfu/ml,做活菌计数备用。6.2取经25€培养18-24小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物51,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5-10-6,约为50-100cfu/ml,做活菌计数备用。6.3取经25匸培养1周的黑曲霉改良马丁斜而培养物，加5ml0.9%无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉他子，吸取出他子悬液51,加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管和当后，取1ml稀释后的砲子悬液，用0・9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4,约为50—100cfu/m

5、l,做活菌计数备用。7细菌计数法：7.1供试液制备取供试品原液作为供试液。7.2回收率测定：培养基稀释法(1)试验组：取供试液1ml等量分注2个平皿中，同时加入50-100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，置30—35°C培养箱培养24-72小时逐日观察结果。(2)菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数。(3)供试品対照组：取供试液1ml等量分注2个平皿屮，立即倾注营养琼脂，置30—35°C培养箱培养24-72小时逐口观察结果，测定供试品本底菌数。(4)回收率的计算：按如下公式计算试验组的加菌回收率：试验组的平均菌落数供试品对照组的平均菌落数100%

6、菌液组的平均菌落数为该株阳性菌的冋收率。结果见农1。8霉菌、酵母菌计数法：8.1供试液的制备：取供试品原液作为供试液。8.2回收率的测定：平血法（1）试验组：取供试液1ml和50-100cfu试验菌同时加入平川I•中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置23-28°C培养箱培养24-72小时，逐日观察结果。（2）菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数。2（3）供试品対照组：取供试液1ml加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24-72小时逐日观察结呆，测定供试品本底菌数。（4）回收率的计算按如下公式计算试验组的加菌回收率：试验组的平

7、均菌落数供试品对照组的平均菌落数100%菌液组的平均菌落数为该株阳性菌的回收率。结杲见表1。9控制菌检査方法：大肠埃希菌检査法：供试液的制备：取供试品原液作为供试液。试验组：取供试液lml加入100ml胆盐乳糖培养基屮，同时加入上述人肠埃希菌液10-100cfu,置35°C培养24小时，取上述培养物0.加1,接种至含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作木底对照。观察后，沿管壁加入数滴靛基质试液，观察。同时取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基，培养18-24小时，观

8、察结果。阴性菌对照组：取供试液1ml加入100ml胆盐乳糖培养基，同时加入上述金黄色衞萄球菌10-100cf