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1、复方香菊冲剂微生物限度检查法的验证（昆山市中医医院江苏昆山215300）【摘要】验证所采用的方法适用于复方香菊冲剂的微牛物限度检查，即确认复方香菊冲剂在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。以保证检验结结果的准确、可靠及检验方法的专属性。【中图分类号】R286.0【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）01-0308-03方法学验证：1.供试品复方香菊冲剂（规格：15g/袋,批号141212,150112,150302）生产供应单位：昆山市中医医院制剂室2.培养基及试药MUG培养基（批号201
2、40901）＞靛基质试液（批号20140106）由北京三药科技开发有限公司牛产，中国药品牛物制品检定所监制；营养肉汤培养基（批号20140708）＞玫瑰红钠琼脂培养基（批号：20140511）＞胆盐乳糖培养基（批号：20140708）＞营养琼脂培养基（批号：20140519）；PH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液（批号：20131220）；由上海博微生物科技有限公司生产。3.仪器设备双人净化工作台（型号：SW・CJ・IC、编号：424047）由苏净集团安泰公司生产；水浴锅（型号：GKCR214、编号：990422）,由通州市泸通实验仪器厂生产
3、；电热蒸气压力消毒器（型号：YX.400Z.编号：R305044）由上海三中医疗器械有限公司生产；TC-15套式恒温器（型号：TC・15）由浙江新华医疗器械厂生产。4.菌种枯草芽也杆菌CMCC（B）63501（4代）、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003（5代）、大肠埃希菌CMCC⑻44102（5代）、白色念珠菌CMCC（F）98001（4代）、黑曲霉CMCC(F)98003(4代).由江苏省药品检验所提供。5•实验依据《中国药典》2010版一部(附录XIIIC微生物限度检查法)。6•实验操作6.1菌液制备方法(1)取经33°C培养18〜2
4、4h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的新鲜肉汤培养物lmL+9MI0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7,制成每ImL含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。(2)取经25°C培养18〜24小吋的白色念珠菌的新鲜培养物lmL+9mL0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6,制成每ImL含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养5〜7天，加入3〜5mL含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将砲子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孑包子悬液至无菌试
5、管内，用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6,制成每ImL含抱子数为50〜lOOcfu的孑包子悬液。6.2供试品溶液的制备称取10g复方香菊冲剂加PH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液冲至lOOmL,混匀，作为1:10供试液。6.3菌落计数方法的验证(平皿法)：(1)试验组a取10个平皿，每2个一组分成5组，分别按大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的顺序进行标记。b取1:10的供试液ImL,分别注入10个平皿中，再依次加入上述5种菌的菌悬液lmL(50〜100)cfu/mL
6、),每种菌平行制备2个平皿，倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别至30〜35°C培养3d和23〜28°C培养5cL(1)菌液组分别取上述制备好的菌液ImL注入平皿内，每种菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。(2)供试品对照组取1:10的供试液lmL分别注入4个平皿，立即倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置30〜35°C培养3d和23〜28°C培养5d。测定供试品本底菌数。(3)稀释剂对照组本品未用特殊方法处理和制备(略)。(4)结果：见表1(5)评价：由表1可见：复方香菊冲剂用平皿菌落计数法3次独立的平行试验中5种菌株的
7、冋收率均高于70%,说明该方法用于细菌、霉菌及酵母菌计数结果是准确的。6.4控制菌检查方法的验证6.4.1菌液制备方法取经33°C培养18〜24h,大肠埃希菌的新鲜肉汤培养物lmL+9mL0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10・5〜10-7,制成每mL含菌数为10〜100cf的菌悬液。6.4.2大肠埃希菌检查方法的验证(1)制备供试液与增菌培养称取10g复方香菌冲剂加PH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液至100mL配成1:10供试液，然后取供试液10讯接至100mL胆盐乳糖培养基中，加验证菌株大肠埃希菌lmL(含菌数为10〜lOOcfu,作
8、为供试品验证组)，置30〜50°C培养18〜24h,必要时可延至48ho(1)MuG与靛基质测定取上述2瓶培养物0.2mL,分别接种至2管SmLMuG培养基的试管内
