微生物限度检查法的方法验证

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1、纯化水微生物限度检查法验证方案验证Fl的：纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。确认该方法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。职责2.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。2.2.验证组长7.1.负责验证方案的起草2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。负责验证报告的审批。负责发放验证证书。负责再验证周期的确认。2.3.质保部2.3.1.负责验证方案审核2.3.2.负责取样及对样品的检验2.3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。2.2.3.3.4.负责验证数据及结果的审核2.2.4.参照标准：2005版中国

2、药典二部附录XIJ微生物限度检杏法。2.2.5.验证项目:细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。2.2.3.合格标准：试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。6.试验材料：6.2.6.被验证产晶：品名纯化水取样点总出水口洗瓶用水洗涤消毒检验量_5ml6.2.7.仪器设备：SYQ/ZDX-35B1型口动座式压力蒸汽灭菌器YOKO-ZX紫外分析暗箱SW-EJ-2FB双人净化工作台101-2A电热鼓风干燥箱6.2.5.SPX-250B型生化培养箱（23〜28°C）PHW-200S恒温培养箱（35〜37°C）CR-50X50X65数显隔水式恒温培养箱（30〜35°C）6.2

3、.6.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.2.7.验证用培养基名称生产厂家批号营养琼脂培养基050519营养肉汤培养基050603玫瑰红钠琼脂培养基050530改良马丁培养基050319改良马丁琼脂培养基0504076.5.验证用菌株：（第3代）验证菌株培养慕培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌营养肉汤30—35°C金黄色葡萄球菌营养肉汤30—35°C枯草芽葩杆菌营养肉汤30—35°C白色念珠菌改良马丁培养基23—28°C黑曲得菌改良马厂琼脂培养慕23—28°C7.菌液制备取经35〜36°C培养18〜24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孑包杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到

4、9ml0.9%无菌氯化钠溶液屮，10倍稀释至10<107约为50〜lOOcfu/ml的菌悬液备用。72取经24〜25°C培养24〜48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液屮，10倍稀释至KT'约为50〜lOOcfu/ml的菌悬液备用。取经24〜25°C培养一周的黑曲霉菌斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将砲子洗脱，然后吸出砲子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集抱子悬液至另一无菌试管内作为菌原液，取此砲子悬液0.1ml加到9.9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释至10书约为50〜lOOcfu/ml的菌悬液备用。8

5、.菌液计数：(每种菌液接种2个平皿)大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽抱杆菌分別划线接种至营养琼脂培养基，置35〜36°C培养二天；白色念珠菌、黑曲霉分别划线接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置24〜25°C培养三天。菌落计数结果(2个平皿计数取平均值)见下表菌落计数结果(cfu/ml)试验次数10。稀释10'稀释KT?稀释123123123大肠埃希菌87.58570.5金黄色葡萄球菌107.591.569.5枯草芽砲杆菌92.579.5745白色念珠菌767984.5黑曲霉5180819.验证方法：细菌、每菌及酵母菌计数方法的验证至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验

6、的回收率。9.1.验证日期9.2.供试品名称及取样点：纯化水取样点总出水口洗瓶用水洗涤消毒9.3.供试品制备方法建立:2005版中国药典规定纯化水微生物限度试验釆用薄膜过滤法检杏。但没规定取样量，出于所使用的滤膜孔径不大于0.45um，直径为50mm,规定侮片滤膜上的菌落数应不超过100个。如果取样量过大，样品含菌量较多，就会造成细菌不宜分散，点计困难；如果取样量过少,不能有效反映样品染菌量。为此参照注射用水微生物限度检查法建立以下儿种方法进行了筛选试验：方法1：每张滤膜取100ml样品做为供试液直接过滤。方法2:每张滤膜取样品30ml用灭菌0.9%氯化钠溶液70ml稀释后作为供

7、试液(100ml)直接过滤。方法3:每张滤膜取样品10ml用灭菌0.9%氯化钠溶液90ml稀禅后作为供试液(100ml)直接过滤。方法4:每张滤膜取样品5ml用灭菌0.9%氯化钠溶液95ml稀释后作为供试液(100ml)直接过滤。验证试验采用方法4制备供试液，其它筛选试验另外报告。931.试验组取供试液100ml和50〜lOOcfti试验菌，分别过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿菌落计数法测定其菌数，每片滤膜上的菌落数应不超过10