微生物限度检查法验证方案

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1、微生物限度检查法验证方案编号：QD/VP01-???版木：第一版山东良福制药有限公司132325330（二O—二年度）二O—二年月H批准二O—二年月H实施实施山东良福制药有限公司质量部组织起草山东良福制药有限公司验证领导小组批准验证方案组织与实施微生物限度检査法验证工作由技术质量部负责组织，中心化验室等有关人员参与实施。验证小组成员方案制订方案审核方案批准目录1.主题内容与适用范围12.相关文件13.验证冃的14.职主贝15.验证内容与方法...16.验证结果评定与结论47.验证周期及拟订再验证项U4&微生物限度检查法验证记录口录4QD/VP01-???1.主题内容与适用范围木方

2、案规定了微生物限度检杳法验证的内容、过程和方法。木方案适用于微生物限度检查法验证。2.相关文件《药品微生物学检验手册》《中国药典》2010年版二部《药晶生产验证指南》2010年版《微生物限度检查法操作规程》SOP-SB-092-A3.验证目的验证所检测的样品、所设左的检验条件及检验程序对可能存在的各类微牛物冇抑制作用，证明所采用的微生物限度检查法能够准确的检验样甜。5.验证内容与方法第1页，共13页5.2细菌、爲菌及酵母菌计数方法的验证5.2.1试验用品5.2.1.1试验产品：XXX三批，分别为：AAA5.2.1.2稀禅液:PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液。5.2.1.3试验

3、用菌利U大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(3)44102]金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯草芽砲杆菌(Bacillussubt订is)[CMCC(B)63501]白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]5.2.1.4试验用培养基：营养琼脂、营养肉汤、虎红琼脂、改良马丁培养基、胆盐乳糖培养基。1.5试验用菌液制备：接种人肠埃希菌、金黄色超萄球菌、枯草芽他杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，

4、30〜35°C培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23〜28°C培养24〜48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。接种黑曲幾的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基屮，培养5〜7天，加入3〜5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，吸出砲子悬液（川管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）到无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含抱子数50〜lOOcfu的抱子悬液。5.2.2验证验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次回收率。5.2.2.

5、1试验组平皿法计数时，取试验町能用的鼠低稀释级供试液lml和50〜lOOcfu试验菌，分别注入平皿屮，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取泄量试验可能用的最低稀释级供试液，第2页，共13页过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50〜lOOcfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定取菌数。5.2.2.2菌液组测定所加的试验菌数。5.2.2.3供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试胡木底菌数。5.2.2.4稀释剂对照组若供试液制备需要分散、乳化，中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀禅剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受

6、影响的程度。试验时，可川相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每lml供试液含50〜lOOcfu,按试验组的供试液制备方法利菌落计数方法测定其菌数。5.2.2.5结果判断在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。若试验组的回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%,照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%,应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄脱过滤法、中和法等方法或联合使

7、用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。5.3控制菌检查方法的验证验证时，依各品种项下微生物限度标准屮规定检杳的控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查法时，应采用大肠埃希菌作为验证菌株。验证试验按供试液的制备和控制菌检查法的规定及下列要求进行。5.3.1菌种检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌利侏存中心获得的冷冻干燥菌种为0代)，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]金黄色