中华跌打酒的微生物限度检查法验证

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1、中华跌打酒的微生物限度检查法验证摘要:目的：建立屮华跌打酒的微生物限度检查法验证。方法：采用阳性试验菌，用三种方法测定回收率。结论：细菌、霉菌和酵母菌的测定采用薄膜过滤法，控制菌检查用常规法。关键词:中华跌打酒；微生物限度；检查法中图分类号:U449.33中华跌打酒具有消肿止痛舒筋活血止血生肌活血祛瘀的功效用于挫伤筋骨新旧瘀患风湿瘀痛等症。其中含有金不换、牛尾蕨、乌药、过江龙、地耳草、牛膝等中药成分，可口服也可外用。根据其中药成分及用药途径，按照2010年版《中国药典》应进行细菌、霉菌、酵母菌及控制菌的检查，并

2、建立微牛•物限度检查方法，加以验证，以保证测定结果的可靠性。1.试验仪器及试样1.1仪器电脑生化培养箱，脉动真空灭菌器，洁净工作台等1.2样品中华跌打酒：批号:111104,111105,111106；生产厂家：广西梧州制药(集团)股份有限公司。1.3实验菌种金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003、铜绿假单胞菌CMCC(B)10104。均由中国药品生物制品检定所提供1.4

3、培养基及稀释剂营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基，胆盐乳糖培养基(BL),改良马丁培养基，改良马丁琼脂培养基，MUG培养基，PII7.0无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液，0.9%无菌氯化钠溶液等。2•细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法的验证2.1菌液制备2.1.1细菌检查的菌液制备：取新鲜的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌的培养物至营养肉汤培养基中，培养18〜24h,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.2酵母菌检查的菌液制备：取新鲜的白色

4、念珠菌的培养物至改良马丁培养基中，培养24〜48h,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.1.3霉菌检查的菌液制备：取新鲜的黑曲霉培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基，培养5〜7d,加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将霉菌抱子洗脱。然后吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0・9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孑包子数为50~lOOcfu的菌悬液，做活菌计数备用。2.2供试液的制备方法取木

5、品原液作为供试液。2.3回收率测定方法试验组菌液组供试品对照组常规法取供试液1ml,并加入各菌液lml注皿取各菌液1ml注皿取供试液1ml注皿加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的平皿加入营养琼脂培养基，加白色念珠菌及黑曲霉的平皿加入玫瑰红钠琼脂培养基培养基稀释法取供试液1ml,分别注入5个平皿中，每皿0.2ml,各皿加入菌液lml取各菌液1ml注皿取供试液1ml,分注5皿，每皿0.2ml薄膜过滤法取供试液lml,加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,用缓冲液冲洗到最后一次加菌液lml取各菌液

6、1ml,加入100mlpII7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液取供试液lml,加入100mlpII7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的样詁贴膜于营养琼脂培养基，加白色念珠菌和黑曲霉的样晶贴膜于玫瑰红钠琼脂培养基细菌置30〜35°C培养2天，计数；霉菌及酵母菌置23〜28°C培养3天，计数。同时作稀释剂和培养基的阴性对照。2.4回收率计算试验组回收率(%)?[(试验组平均菌落数一供试甜对照组平均菌落数)三菌液组平均菌落数JX100%回收率组别金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽抱杆菌白色

7、念珠菌黑曲霉供试品対照组菌落数阴性对照菌落数常规法1111044.5%36.2%52.0%32.9%25.3%无菌落生长无菌落生长1111055.5%36.8%50.0%35.2%29.6%无菌落生长无菌落生长1111063.6%37.2%48.8%33.8%26.7%无菌落生长无菌落生长培养基稀释法11110437.8%64.7%57.1%60.0%48.9%无菌落生长无菌落生长11110533.3%62.3%55.4%61.7%53.1%无菌落生长无菌落生长11110637.7%67.7%53.7%68.4

8、%48.4%无菌落生长无菌落生长薄膜过滤法111104101.4%91.2%98.8%94.6%96.0%无菌落生长无菌落生长11110598.5%96.7%101.3%99.6%93.0%无菌落生长无菌落生长111106101.2%94.7%100.0%96.8%98.5%无菌落生长无菌落生长2.5结果：常规法及培养基稀释法中，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌、口色念珠菌、黑