巴洛沙星片微生物限度检查方法验证试验探究

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1、巴洛沙星片微生物限度检查方法验证试验探究【摘要】目的建立巴洛沙星片微生物限度检查法。方法制备1:10、1:100的供试液，采用离心沉淀与薄膜过滤的方法，来测定试验菌的回收率。结果供试品稀释100倍后，采用离心沉淀与薄膜过滤法，回收率即可达70%以上。结论可采用离心沉淀与薄膜过滤法消除巴洛沙星的抑菌活性，建立其微生物限度检查法。�【关键词】巴洛沙星；验证试验；离心沉淀；薄膜过滤��AmethodforvalidationofmicrobiallimittestsofbalofloxacintabletsLENGJia-wei.Th

2、eDrugControlINstitueofShandong,Shandong250101,China�【Abstract】ObjectiveTosetupamethodfordermimingmicrobiallimitsinbalofloxacintablets.Methods1:10,1:100sampletestsolutionwereprepared,andthecentrifugation,membranefiltrationmethodwereapplied.Therecoverywasdetected.Resul

3、tsWhenthesampledilution100times,7therecoverywasover70%withthemethodofcentrifugationandmembranefiltration.ConclusionAftermethodofcentrifugationcollectionandmembranefiltration,theamountofbacteriaandcontroledbacteriacanbedeterminedinbalofloxacintablets.�【Keywords】Balofl

4、oxacin;Validation;Centrifuqation;Membrancefiltration�巴洛沙星是第三代喹诺酮类抗菌药，具有广谱的抗菌活性［2］。根据《中国药典》2005年版二部规定所有非规定灭菌制剂及其原料、辅料，在建立其微生物限度检查法之前，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法是否适合于该制剂的细菌、霉菌及酵母菌数的测定和控制菌检查方法［1］。据此作者对巴洛沙星片的微生物限度检查法进行了验证试验的研究，建立了巴洛沙星片的微生物限度检查方法。现报告如下。�1仪器与材料�1

5、.1仪器7BSC-1500ⅡA2-X生物洁净安全柜；MJ-250I生化培养箱；GHP-9270隔水式恒温培养箱；SartoriusCP225D电子天平；HTY-2000B集菌仪(杭州泰林医疗器械厂生产)；NS01-75D2薄膜过滤器(北京牛牛基因技术有限公司)。�1.2培养基营养琼脂培养基(批号：081215)、玫瑰红钠琼脂培养基(批号：080520)、营养肉汤(批号：070313)、改良马丁培养基(批号：0810092)、胆盐乳糖增菌液(批号：080117)稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号：080921)均购于

6、北京三药科技开发公司。�1.3药物巴洛沙星片(山东罗欣药业090230)规格：0.1g/片。�1.4菌株大肠埃希菌(Eschrichiacoli)［CMCC(B)44102］；枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)［CMCC(B)63501］；金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)［CMCC(B)26003］；白色念珠菌(Candidaalbicans)［CMCC(F)98001］；黑曲霉(Aspergillusniger)［CMCC(F)98003］均购于中国生物制品检定所医学菌种保藏中心，以上菌

7、种均为第3代菌种。�2验证方法与结果�2.1菌液制备［1］按《中国药典》2005年版二部附录“微生物限度检查法”项下方法制成50~100CFU/ml的菌悬液。�2.2供试液制备取供试品10g，研磨加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成1:10的供试液，再稀释成1:100的供试液。取1:100的供试液以500r/min离心37min取上清液，经过滤后备用。�2.3菌数计数方法的验证�2.3.1细菌数验证方法的预试验�2.3.1.1试验组取上述制备好的1:100供试液1ml，按薄膜过滤法处理，用冲洗液分别冲洗滤膜5次

8、，100ml/次。在最后一次冲洗液中分别加入试验菌50~100CFU/ml，取出滤膜分别贴于营养琼脂平板上。将平板置30℃~35℃培养48h，计数。�2.3.1.2菌液组测定加入的每一种试验菌数。�2.3.1.3供试品对照组按试验组的方法和条件测定供试品的本底数