微生物限度检查方法验证

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1、微生物限度检查方法验证本品为中成药制剂，系口服给药制剂，按中国药典2005年版要求，需做细菌、霉菌及控制菌检查，同时需对检验方法进行验证，以确保检验方法的准确口J靠。一、试验材料及方法1.材料1.1试验样品：AAAA片(BBBBBBBBBBB有限公司)批号：XXXXX,规格:XXX1.2实验菌株：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、枯草杆菌CMCC(B)63501、口色念株菌CMCC(F)98001,购自屮国医学细菌保藏屮心。2.方法2.1菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌新鲜培养物

2、至营养肉汤中30~35°C，培养18~24小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基屮25°C，培养18-25小吋，上述培养物用％・9无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100CFU的菌悬液，备用。2.2试液制备：取本品制成仁10的供试液备用。2.3试验组：取1：10的供试液1ml,置平板中，加入营养琼脂培养基15~20ml,放冷，倒置平板，30~35°C温度培养24~28小时，白色念珠菌用改良马丁培养基，于25°C培养72小吋，观察结果。根据药典要求药品微生物学检查方法验证主要用规定的已知菌数的试验菌加入到已制备处理好的样品溶

3、液屮，测定其数据，同时测定样品本底菌数，并设置稀释对照组。根据已加入的菌数及测得菌数，计算回收率，规定耍求：试验组及稀释组的菌回收率均不得低于7%,否则需重新选择样品处理方法，再进行冋收率直到所采取的方法冋收率试验达7%以上方可认为验证试验符合要求。2.4菌液组按中国药典2005年版微生物限度菌落计数方法测定每1ml中菌数。2.5供试品对照组：取规定量的供试液，按中国纱典2005年版微生物限度菌落计数方法测定本品的本底数。2.6稀释剂对照组取ph7.0无菌氯化钠■蛋口月东缓冲液1ml,余下同试验组。2.7验证试验至少应进行二次独立的平行试

4、验，并分别计算各次试验的菌回收2.8菌冋收率计算试验组平均数一供试品对照组平均数试验组的菌冋收率（.9）=菌液组的平均菌落数稀释剂对照组平均菌落数稀释剂对照组菌回收率（.9）=菌液组的平均菌落数2.9结果判断：对照组的菌冋收率不低于7%,若试验组及稀释组的菌冋收率均不低于7%,则符合验证试验，可按此方法进行微生物限度测定；若任一次平行试验组的菌冋收率低于70%,则不符合验证试验要求，应建立新的方法并重新进行验证。2.1AAAA片大肠埃希菌冋收率测定结果见表1表1AAAA片大肠埃希菌冋收率测定试验次数供试品稀释倍数菌落让数冋收率试验组菌液组

5、供试品对照组稀释剂对照组试验组稀释剂对照组11:10405304975%92%21:10415304977%92%2.2AAAA片金黄色葡萄球菌回收率测定结果见表2表2AAAA片金黄色葡萄球菌冋收率测定试验次数供试品稀释倍数菌落计数回收率试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组试验组稀释剂对照11：10281293029096%99%21:102962930284101%97%2.3AAAA片枯草芽抱杆菌回收率测定试验次数供试品稀释倍数菌落计数冋收率试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组试验组稀释剂对照组11:10737806894%87%21

6、:10667806985%88%1.4AAAA片口色念珠菌回收率测定，见表4表4AAAA片白色念珠菌冋收率测定结果试验次数供试品稀释倍数菌落计数冋收率试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组试验组稀释剂对照组11:10107120010289%85%21:10104120011487%95%3.验证试验小结上述试验表明：木品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌生长无影响，其试验组、稀释剂对照组回收率均达70%以上，符合屮国药典2005年版一部微生物限度检查验证试验要求。以此确定本品微生物限度检查如下：取木品10g研磨均匀，加灭菌

7、PH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液100ml制成1:10混悬液，采用常规法，照《屮国药典》2005年版一部微生物限度检查项F进行检查、判断。