栓剂微生物限度检查方法验证方案

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1、MethodValidationScheme方法学验证方案栓剂微生物限度检查ApprovalBeforeExecution审核和批准Writtenby起草姓名职务签名日期化验员Reviewedby审核质检部部长质管部部长Approvedby批准质量副总经理××××××有限公司目录1.概述32.目的33.范围34.依据35.责任36.人员培训47.所需文件48.所需仪器仪表校验59.试验用培养基、稀释剂、冲洗液、菌种及消毒剂510.验证内容511.结果分析及评价912.进度计划913.再验证周期101.概述

2、根据2015版药典要求，在建立某一药品微生物限度检查方法时应对其检查的方法进行验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。若药品的组分或生产工艺发生改变时，还应对其检验方法进行重新验证，以确认供试品在该实验条件下无抑菌性或其抑菌活性可忽略不计。此次验证应进行3次独立试验，所有验证人员都应进行GMP和岗位SOP培训，设备应进行校验。2.目的确保在实际检验条件下“醋酸氯己定痔疮栓”微生物限度检查方法的准确性、有效性和重现性。3.范围适用于“醋酸氯己定痔疮栓”的微生物限度检查方法。4.依据2015年版中国药

3、典四部通则1105、1106、1107微生物限度检查法5.责任姓名部门职务职责吴霜质量检验部化验员起草验证方案，负责验证方案的实施，数据的收集、统计，完成验证报告。代兵质量检验部部长审核验证方案，组织验证方案的实施，审核验证报告。王秀芝质量管理部部长审核验证方案、报告，协调验证方案的实施。金霞工程部计量员负责本次验证中仪器仪表的确认。何笛公司主管副总经理批准验证方案，批准验证报告。1.培训所有相关人员均应按如下内容，在验证开始之前进行培训，以使每一名参与验证工作的人员明确自己的职责，更好地完成本次验证工作

4、。培训内容：①本次验证的性质；②验证的内容③验证小组成员的分工及职责；④验证方法及职责⑤取样计划及职责；⑥验证进度计划安排2.所需文件文件资料编号存放地点菌种传代、储存、接种操作程序GCZ—Zk—101质量检验部2015年版中国药典四部——质量检验部1.所需仪器仪表的校验器具名称规格型号器具编号校验证书编号校验部门有效期至电热恒温培养箱生化培养箱立式压力蒸汽消毒器电热鼓风机电热恒温培养箱2.试验用培养基、溶剂、冲洗液、菌种及消毒剂验证内容培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培

5、养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养、甘露醇氯化钠琼脂培养基稀释剂、冲洗液：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液试液：0.9%无菌氯化钠、1%二盐酸N，N-二甲基对苯二胺试液菌种：包括金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[CMCC（F）98003]，以上菌种应均由中国药品生物制品检定所提供，传代次数不得超过五代。消毒剂：75%乙醇；3

6、%双氧水。1.验证内容10.1微生物计数法10.1.1菌种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉10.1.2菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，30~35℃培养18~24小时，取新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖琼脂培养基中20~25℃培养2～3天，取新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基中20~25℃培养5～7天，取黑曲霉的新鲜培养物加入

7、3〜5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8°C,在验证过的贮存期内使用。10.1.3供试液：供试液制备：称取10g供试品，置锥形瓶中，加10mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液置45℃水浴浸泡10分钟使熔融，加无菌聚山梨酯8010ml，使乳化，再加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml

8、，保温，混匀，作为1：10供试液。10.1.4操作方法需氧菌、霉菌及酵母菌菌落计数验证方法：验证试验至少进行3次独立的平行试验并分别计算各试验菌株每次试验的回收率。阴性对照：取稀释剂10mL按下述检查方法进行。一、需氧菌：1、金黄色葡萄球菌（1）试验组：取1：10供试液9.9mL加试验菌0.1mL混匀，滤过，先用200ml1%聚山梨酯80PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗，再用700ml冲洗液分次冲洗，每次100ml，