陈香露白露片微生物限度检查方法验证研究

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1、陈香露白露片微生物限度检查方法验证研究【摘要】　　目的：建立陈香露白露片微生物限度检查方法。方法：根据该样品的微生物限度标准，按《中国药典》2005年版一部附录微生物限度检查法的验证试验指导原则，用委托厂家3个批号的陈香露白露片进行验证试验，以考察确定陈香露白露片微生物限度的检查方法。首先用常规法进行预试验，初步考察该样品对试验菌检测的影响，然后根据预试验结果，用离心沉淀集菌法进行再试验。结果：常规法试验时，大肠埃希菌、白色念珠菌的回收率均大于70%，而金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率小于70%，控制菌

2、检查检出试验菌。采用离心沉淀集菌法试验时，可以有效消除抑菌作用，使金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率大于70%。结论：采用离心沉淀集菌法可以有效消除抑菌作用，简便、准确。【关键词】微生物限度检查验证试验离心沉淀集菌法　　ValidationofMicrobialLimitTestforChenxianglubailuTablets　　YINChunrong,SUNPing,XIAOJuli　　（TheInstituteofFoodandDrugControl,YunnanChuxiong675000,

3、China;YunnanLongfaPharmaceuticalLimitedpany,YunnanChuxiong675000,China）　　〔Abstract〕Objective:ToestablishamicrobiallimittestmethodforChenxianglubailutablets.Methods:ThemicrobiallimittestforChenxianglubailutabletsicrobiallimitstandardforthisproductandtheprin

4、cipleofthevalidationofmicrobiologicaltestin“ChinesePharmacopoeia”(2005),andtestedinthreebatchesofChenxianglubailutablets.Thetestethods.Results:UG培养基、胆盐乳糖发酵培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基。　　1.3菌种　　金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕、大肠埃希菌〔CMCC（B）44102〕、枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌〔CMC

5、C（F）98001〕，均来源于云南省食品药品检验所。　　2验证试验　　2.1试验菌液的制备　　接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，置30～35℃培养18～24h，分别取上述培养物1mL，加0.9%无菌氯化钠溶液9mL，10倍递增稀释，取稀释液1mL，加入到1个平皿中，每种菌的每1个稀释级平行制备2个平皿，倾注营养琼脂培养基，置30～35℃培养24～48h，计数，选择每1mL含菌数为50～100cfu的稀释级菌悬液，作为验证试验用菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良

6、马丁培养基中，置23～28℃培养24～48h，取上述培养物1mL，加0.9%无菌氯化钠溶液9mL，10倍递增稀释，取稀释液1mL，加入到1个平皿中，每1个稀释级平行制备2个平皿，倾注玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28℃培养72h，计数，选择每毫升含菌数为50～100cfu的稀释级菌悬液，作为验证试验用菌悬液。　　2.2供试液的制备　　从两瓶样品中取样品10g，至灭菌匀浆杯中，加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100mL，经匀浆仪混匀，制成1∶10的供试液。陈香露白露片3个批号样品同法操作。　　2.3细菌数

7、、霉菌及酵母菌数计数方法的验证　　2.3.1预试验（常规法）　　（1）试验组：取1∶10的供试液1mL，加入到1个平皿中，同法制备8个平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1mL（含50～100cfu），每种菌平行制备2个平皿；取1∶100的供试液1mL，加入到1个平皿中，同法制备8个平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1mL（含50～100cfu），每种菌平行制备2个平皿；取1∶1000的供试液1mL，加入到1个平皿中，同法制备8个

8、平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1mL（含50～100cfu），每种菌平行制备2个平皿。含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的试验平皿倾注营养琼脂培养基，置30～35℃培养48h，计数；白色念珠菌的试验平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28℃培养72h，计数。　　（2）菌液组：分别取已制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1mL（含5