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《1044.利用mtt法测定环磷酰胺对hela细胞增殖的抑制效果》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、利用MTT法测定环磷酰胺对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：利用MTT法测得环磷酰胺对Hela细胞的增殖确实有较好的抑制作用，通过制片能观察到典型的凋亡细胞和凋亡小体。本实验得在所设浓度梯度内药物使用的浓度越高，其抑制效果越好。药物浓度（x）与其抑制效果（Y）间成一线性关系，其方程为Y=0.0007x+0.3591，其中R2=0.9635.这将为找到合适的使用浓度提高一定的依据。关键词：MTT法环磷酰胺Hela细胞抑制前言：癌症是严重危害人类健康的主要疾病之一,攻克癌症一直是世界瞩目的研究课题.目前已经出现了多种抗癌药物，其中环磷酰胺也是一种较有效果的
2、药物。 环磷酰胺在体外无活性,但在体内经肝细胞色素P-450氧化生成中间产物醛磷酰胺(aldophosphamide),再在肿瘤细胞内分解出磷酰胺氮芥(phosphamidemustard)与细胞的DNA发生烷化作用,形成交叉联结,从而抑制肿瘤细胞的生长繁殖。然而环磷酰胺既能抑制肿瘤细胞生长与繁殖,又会影响人体正常细胞的生长和发育【1】。面对环磷酰胺抗癌药物这把双刃剑，使用时必须把握好其使用，以求以最少的危害达到最好的抗癌效果。对于同一药物，不同浓度对肿瘤的抑制效果不同，找到两者之间的关系有助于找到效果和安全之间的平衡点，将有助于推动人类的抗癌事业。
3、本实验利用MTT法测定不同浓度环磷酰胺对Hela细胞增殖的抑制作用，以期寻找出该药物的适宜使用浓度。1材料与方法1．1实验材料：环磷酰胺试剂MTT试剂（现配现用）靶细胞：美国购入的海拉宫颈瘤细胞系（HELA细胞），实验室传代保种待用。1．2实验方法：1.21.接种：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为2～3*104/ml，每孔加入细胞悬液200μl，使每孔内的细胞数为4000-6000个。1.22培养与药物处理：培养箱内培养24～36h，吸出培养液加入不同浓度梯度的环磷酰胺（50、100、200、400ug/ml）各200μl，，每个浓度至
4、少接种4孔作为重复实验.并设对照组：不加药物，只加培养液。1.23.呈色：培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞生长情况后，每孔加5mg/ml的MTT溶液20μl，继续孵育4h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO150μl，振荡30min，使结晶物充分融解。1.24比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。1.25计算与分析2.结果：表一表头内容环磷酰胺浓度 对照50ug/ml100ug/ml200ug/ml400ug/ml 吸光值0.8690.5490.4810.4300.331
5、 抑制率 36.82%44.65%50.52%61.91%2.1实验效果良好，环磷酰胺对Hela细胞的增殖确实有较好的抑制作用，在MTT试剂的显色作用下，用肉眼也能明显看出药物对细胞的抑制效果，且成一定梯度。在本浓度梯度内药物使用的浓度越高，其抑制效果越好（如表一和图一所示）。由本实验看出400ug/ml的环磷酰胺对Hela细胞的增殖抑制率已高达61.91%，之间的关系为以下线性方程：Y=0.0007x+0.3591R2=0.9635.2.2实验中通过制片观察，观察到典型的凋亡细胞和凋亡小体。可见环磷酰胺能通过诱导癌细胞发生凋亡而达抗癌作用。图一不同
6、浓度环磷酰胺对癌细胞的抑制3.分析讨论：3.1本实验结果和本实验的其他组（各组所设浓度梯度不同）所得的结论基本一致，确实是随着环磷酰胺使用浓度的升高，其对癌细胞的抑制效果也随之升高。所以单纯从抑制效果出发，增加其使用浓度可以达到增效的目的。但药物不仅对癌细胞增殖有抑制作用,同样对人体正常细胞也会带来不利影响.而且有研究以小鼠为对象，对环磷酰胺的毒副作用进行研究得,大剂量组(A组)小鼠在每周期给药后1周内,即可观察到行动迟缓、反应迟钝、精神食欲较给药前差,化疗间期有所恢复;小剂量、高频率组(B、C组)小鼠给药后行动较为灵活,反应较为灵敏,精神食欲较给药
7、前无明显变化[2]。因此不能一味地最求高浓度大剂量.要根据个体情况,在一定抑制效果范围内选择合适的浓度.3.2根据本次试验各组的实验效果比较,抑制率最高的是67.03%(800ug/ml)与浓度为400ug/ml的抑制率61.91%相差不大，而且已有较好的效果，所以较推荐使用此浓度。3.3环磷酰胺能过诱导癌细胞发生凋亡,出现典型的凋亡细胞和凋亡小体。诱导癌细胞凋亡作用与直接杀伤作用造成的坏死完全不同,凋亡的细胞基本不破坏,不会释放出引起炎症的物质,癌细胞通过这种死亡方式而引入一个向恶性程度降低的归宿方向,从而达到控制癌症的效果,这也是这种药物治疗作用
8、的机理之一[2-7]。这也显示了环磷酰胺与其他抗癌药物的优势和显著效果，所以对这种机制和对环磷酰胺使用量的更
