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《1040.利用mtt法测定不同抗肿瘤药物对hela细胞增殖的抑制效果》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、利用MTT法测定不同抗肿瘤药物对Hela细胞增殖的抑制效果摘要:对肿瘤细胞生物学特性的研究,使大量抗肿瘤化疗药物应用于临床,使肿瘤患者的治愈率及生存率获得了明显的提高。环磷酰胺是治疗恶性肿瘤最常用的烷化剂代表药物,具有广谱抗癌作用,是联合化疗、手术和放疗辅助化疗的常用药物之一,因此选用环磷酰胺对Hela细胞处理计算其抑制率.本实验结果表示:浓度为:50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml,400ug/ml的环磷酰胺对Hela细胞增殖的抑制率呈现明显的加强.关键词:Hela细胞MTT法测定环
2、磷酰胺环磷酰胺可使血清中假胆碱酯酶减少，使血清尿酸水平增高，因此，与抗痛风药如别嘌呤醇、秋水仙碱、丙磺舒等同用时，应调整抗痛风药物的剂量。此外也加强了琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用，可使呼吸暂停延长。环磷酰胺可抑制胆碱酯酶活性，因而延长可卡因的作用并增加毒性。前言中必须明确说明实验的目的1实验材料与试剂1.1实验材料:Hela细胞系1.2试剂:环磷酰胺溶液(50ug/ml100ug/ml200ug/ml400ug/ml)MTT溶液的配制方法2实验方法2.1、普通MTT法实验步骤(标准曲线测定)2.1.1
3、.稀释细胞：用0.25%胰蛋白酶消化贴壁生长的细胞，用含5%～10％胎牛血清的培养液将细胞吹打为单细胞悬液，调整细胞浓度约为5´105个/ml；取100μl加入900μl的培养液内，得到浓度约为5´104个/ml作为原初浓度的细胞。对原初浓度的细胞进行1：1倍比稀释，分别得到1：2、1：4和1：8的稀释细胞（细胞浓度约为2.5´104个/ml、1.25´104个/ml和0.625´104个/ml）。2.1.2.接种细胞：取上述的各浓度的细胞各200μl，接种到96孔板内；一般同一浓度的细胞接种4孔作
4、为重复实验。同时，将未知浓度的细胞200μl作为待测样品同样加到96孔板的4个孔内。2.1.3.培养细胞：同一般培养条件，培养3～5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。2.1.4.呈色：培养3～5天后，每孔加5mg/ml的MTT溶液20μl，继续孵育4h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO150μl，振荡30min，使结晶物充分融解。2.1.5.比色：选择490nm或570nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。2.1.6.分析与计算：通过Excel
5、软件以吸光值为横坐标，接种细胞浓度为纵坐标绘制曲线；生成接种细胞浓度与吸光值间的趋势曲线及其指数方程，根据该方程计算出未知浓度的原始接种浓度。2.2药物MTT法实验步骤2.2.1.接种：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为2～3´104/ml，每孔加入细胞悬液200μl，使每孔内的细胞数为4000-6000个。2.2.2.培养与药物处理：培养箱内培养24～36h，吸出培养液加入不同浓度梯度的各种抗肿瘤药物各200μl，原则上，每个浓度至少接种4孔作为重复实验，否则难以反应真实情况。2.2.
6、3.呈色：培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞生长情况后，每孔加5mg/ml的MTT溶液20μl，继续孵育4h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO150μl，振荡30min，使结晶物充分融解。2.2.4.比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。2.2.5.计算与分析：按照公式计算各种药物处理对细胞增殖率的影响。细胞增殖抑制率＝（未加药物处理的对照组吸光值－药物处理组的吸光值）/未加药物处理的对照组吸光值。3实验结果由实验数据表
7、示:光吸收值与环磷酰胺的浓度呈负相关,证明随着环磷酰胺浓度从50ug/ml到200ug/ml的升高,对Hela细胞增殖的抑制率升高.实验数据下表表示:表1实验不同浓度环磷酰胺处理的光吸收值环磷酰胺对照组50ug/ml100ug/ml200ug/ml400ug/ml光吸收值0.8690.5490.4810.4300.331抑制率036.82%44.65%50.52%61.91%图1不同浓度环磷酰胺处理的光吸收值对比4实验分析4.1环磷酰胺是治疗恶性肿瘤最常用的烷化剂代表药物,具有广谱抗癌作用,是联合化
8、疗、手术和放疗辅助化疗的常用药物之一,环磷酰胺的毒副作用主要是免疫抑制[1]。临床适应症:环磷酰胺为目前广泛应用的烷化剂,对淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤均有效,对乳腺癌、丸肿瘤、卵巢癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、横纹肌瘤及骨肉瘤也均有一定疗效[2]。4.2实验结果表示:环磷酰胺浓度最高组400ug/ml处理的Hela细胞生长相对是最慢的,抑制率为61.91%;50ug/ml组Hela细胞生长相对是最慢的,抑制率为36.82%.抑制率随着药物浓度呈正相关.4.3实验组
