1042.利用mtt法测定不同浓度卡铂对hela细胞增殖的抑制效果

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1、利用MTT法测定不同浓度卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：本实验主要探讨不同浓度的卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果，利用MTT法来检测细胞相对数和相对活力，实验结果表明，不同浓度卡铂对Hela细胞的抑制率不同，各个浓度均对细胞有不同的抑制效果，抑制率最大的为卡铂浓度4.8ug/ml的培养液，其平均抑制率为49.61%，接近半数抑制浓度。关键词：MTT不同浓度卡铂Hela细胞增殖抑制TheUsingofMTTmethodtodeterminedifferentconcentrationsofcarboplatin’sinhibitoryeffecttotheHelacellProl

2、iferationAbstract:InthisexperimentfocusedonthedifferentconcentrationsofcarboplatinonHelacellproliferationinhibitoryeffect,usingMTTmethodtodetectcellsrelativenumberandrelativevitality,experimentalresultsshowthatdifferentconcentrationsofcarboplatinonHelacellsinhibitionrateisdifferentinvariousconc

3、entrationsoncellshavedifferentinhibitoryeffect,inhibitingrateforthelargestconcentrationofcarboplatinis4.8ug/ml,theaverageinhibitionratewas49.61percent,closetomedianinhibitoryconcentration.Keywords:MTTdifferentconcentrationsofcarboplatinHelacellproliferationinhibitionHela细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒转

4、型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二位最常见的恶性肿瘤。但早期宫颈癌的发生，特别是年轻化趋势十分明显。宫颈癌的化疗是以铂类药物为基础的化疗[1]。卡铂为第二代铂类化合物，其生化物征与顺铂相似，是近年来广泛受到重视的治疗癌症的新药。本文通过测定不同浓度卡铂对Hela细胞增殖的抑制率，从而得出卡铂对于宫颈癌细胞的抑制具有良好的效果。为临床上卡铂的应用提供参考。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞来源美国购入的海拉宫颈瘤细胞系（HELA细胞），实验室传代保种。1.2方法（1）接种：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为2～3´1

5、04/ml，每孔加入细胞悬液200μl，使每孔内的细胞数为4000-6000个。（2）培养与药物处理：培养箱内培养24h，吸出培养液加入不同浓度梯度的各种抗肿瘤药物各200μl，每个浓度至少接种4孔作为重复实验，否则难以反应真实情况。（3）呈色：培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞生长情况后，每孔加5mg/ml的MTT溶液20μl，继续孵育4h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO150μl，振荡30min，使结晶物充分融解。（4）比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。（5）计算与分析：按照公式计算各种药物处理

6、对细胞增殖率的影响。细胞增殖抑制率＝（未加药物处理的对照组吸光值－药物处理组的吸光值）/未加药物处理的对照组吸光值。若该值为负说明药物对细胞增殖具有抑制作用，若值为零表明药物对细胞增殖无影响；若值为正说明药物对细胞增殖具有促进作用。(6)对照设置：设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），且必须设置对照孔（细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜）。2结果2.1MTT法测定化疗药物的平均抑制率 表一不同浓度的卡铂对Hela细胞的抑制效果卡铂浓度对照　0.6ug/ml1.2ug/ml2.4ug/ml4.8ug/ml490nm波长下的吸光值0.7740.5700.4730.4150.390相对吸

7、光值-0.204-0.301-0.359-0.384存活细胞个数（个）1073938863833细胞增殖抑制率　-26.36%-38.89%-46.38%-49.61%注：细胞增殖抑制率＝（药物处理组的吸光值－未加药物处理的对照组吸光值）/未加药物处理的对照组吸光值图一不同浓度的卡铂对Hela细胞的抑制率表二不同细胞个数浓度在490nm下的吸光值细胞数孔数空白对照10000个5000个2500个1250个E0.0691.3811.2930.8790.391