1022.mtt法测定卡铂对hela细胞增殖的抑制效果

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1、MTT法测定卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：本实验采用不同浓度的卡铂，作用于体外培养的Hela细胞，用MTT法检测其对Hela细胞的抑制率。实验结果表明卡铂对Hela细胞的增殖抑制作用呈现出剂量-效应关系。关键词：卡铂，Hela细胞，MTT法卡铂(Carboplatin，CBP)，又名碳铂。化学名为顺式-1、1-环丁烷二羧酸二氨铂，分子式：C6H12N2O4Pt。卡铂是继顺铂后上市的另一个铂类抗肿瘤药，属于第二代铂复合物抗肿瘤药物[1]。其药理作用机理与顺铂相似，属于金属配位剂；它与DNA配位结合生成交叉链，改变了DNA的化学结构，从

2、而影响细胞的复制；它也与烷化剂的作用相似，抑制肿瘤生长，属时相周期非特异性的抗癌药[2]。卡铂作为一种抗肿瘤药物，对宫颈癌的治疗效果已得到肯定，通常与其它抗癌药物联合使用[3]。由于患者对不同剂量化疗药物的敏感性差异较大，且化疗药物均具有毒副作用[4]。因此，筛选出药物治疗肿瘤的敏感剂量，对指导临床用药，提高疗效，减轻毒副作用等具有重要意义。在多种体外抗癌药物筛选方法中，MTT法是备受推崇的检测方法，具有简单，快捷，经济等优点。本实验通过不同浓度的卡铂作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用MTT法检测其对Hela细胞的抑制率，并对实验结果进

3、行分析，为敏感剂量的进一步筛选提供参考。1.材料与方法1.1细胞与试剂Hela细胞：即人宫颈癌上皮细胞，因为具有增殖迅速等特点，被广泛用于生物学与医学研究。卡铂：铂类抗肿瘤药，100mg/支。分别设置5组不同的浓度梯度(表1)。表1不同梯度卡铂的浓度设置4组别浓度梯度(ug/ml)125501002002501503006003102040804612244852040801601.2方法1.2.1接种：消化Hela细胞成悬液，并调整浓度，使其处于2～3×104/ml之间。用移液枪向96孔板中加细胞悬液，每孔200μl。1.2.2培养与药物

4、处理：培养箱内培养24～36h后，吸出培养液，加入不同浓度梯度的卡铂溶液各200μl，每个浓度接种4孔作为重复实验。同时设置空白对照孔和不加药物对照孔。置于培养箱内继续培养3天。1.2.3呈色：加5mg/ml的MTT溶液，每孔20μl，继续培养。4h后弃去孔内培养上清液，然后加入DMSO，每孔150μl，振荡30min。1.2.4比色：在波长为490nm下，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值。1.2.5计算与分析：按如下公式计算各浓度梯度对细胞增殖率的影响。细胞增殖抑制率＝(未加药物处理的对照组吸光值－药物处理组的吸光值)/未加药物处理的对

5、照组吸光值。若该值为正，说明药物对细胞增殖具有抑制作用；为零表明药物对细胞增殖无影响；为负说明药物对细胞增殖具有促进作用。2.结果与分析2.1五组不同浓度梯度的卡铂作用于Hela细胞48h后，均出现了不同程度对Hela细胞增殖活性的抑制。随着药物浓度的增加，细胞的抑制率也有增加的趋势(表2)。当卡铂浓度为最高的600ug/ml时(第二组)，细胞的抑制率也达到最高，为93.84%，此时基本上所有的Hela均已被抑制，丧失生理活性。2.2卡铂能明显抑制Hela细胞的增殖，对Hela细胞的增殖抑制作用基本上能呈现出剂量-效应关系。表2不同浓度梯度

6、的卡铂对Hela细胞的抑制率组别剂量(ug/ml)抑制率(%)12519.25%45010020035.29%52.58%79.68%25015030060047.08%74.25%76.30%93.84%31020408043.97%31.47%44.82%40.16%4612244826.36%38.89%46.38%49.61%52040801609.72%26.30%21.44%49.92%3.讨论3.1实验证明不同浓度的卡铂对Hela细胞增殖的抑制作用呈现出量效关系，可以推测，卡铂对生物体内的宫颈癌细胞的抑制作用也同样会呈现出这样

7、的关系，但线性应该有所改变。同时，卡铂对Hela细胞的抑制率也与药物作用的时间有关，作用时间越长，抑制率越高[5]。3.2研究表明卡铂主要通过肾脏排泄，50%～75%在4小时内排泄完毕，90%在24小时内排泄。与顺铂不同相比，肾小管不参与卡铂的排泄，所以卡铂对肾脏的毒性较小[3]。作为抗癌药物的筛选，应当选择抑制率最高而浓度最低的药物剂量，以减少对机体的伤害。在本实验中，当药物浓度为100ug/ml时，对细胞的抑制率仅略大于50%，有较优抑制率的浓度在150~200之间。这是否可以说明使用卡铂可以使用较大的剂量，这需要作进一步信息的临床研究

8、。3.3毒性检测有多种不同方法，可能会产生不同的检测结果。对正确判断药物作用效果，选择适合的检测方法就显得尤其重要。在较大的剂量范围及较宽的细胞密度内，SRB法比MIT法准确稳定