[精品]利用MTT法测定高三尖杉酯碱对A549细胞增殖的抑制效果及细胞凋亡的观察.doc

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1、利用MTT法测定高三尖杉酯碱对A549细胞增殖的抑制效果及细胞凋亡的观察摘要：目标:研究高三尖杉酯碱(HHT)对A549细胞增殖抑制效果。方法：使用MTT比色法、吉姆萨(Giemsa)染色法和叮噪橙(AO)染色法观察经过不同浓度的IIIIT处理的A549细胞，观察其细胞活力和形态变化。结果：随着HTT浓度增加，细胞增长抑制率显著增加；高浓度HTT会导致细胞凋亡。结论：高三尖杉酯碱(HHT)显著抑制了A549细胞的增殖，而且高浓度HTT会造成细胞凋亡。关键字：高三尖杉酯碱(HTT)A549抑制凋亡ApoptosisObserved

2、ofA549CellandMeasuredtheCellInhibitionEffectofHomoharringtonineProliferationbyMTTAbstract:Objective:TostudytheinhibitingeffectofHomoharringtonine(HHT)onA549cellproliferation.Methods：WithdifferentconcentnitionsofHomoharringtonine(HHT)invitroprocessingofA549Cells,MTTas

3、say,acridineorangestainingwereusedtodeterminecellviabilityandmorphologicalchanges.ResultsUsingdifferentconcentrationsofHomoharringtonine(HHT)todealwithA549cells,withtheincreaseindrugconcentration.cellinhibitionrateincreasedsignificantly;highconcentrationmadethecellap

4、optosisandroundandthecellcoressolidify.ConclusionHomoharringtonine(HHT)inhibitedthegrowthofA549cellsignificantly,andhighconcentrationmadethecellapoptosis.Keywords:Homoharringtonine(HHT),A549,inhibiting,apoptosisBUS：MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenyt

5、etrazoliumromide,汉语化学名为3-(4,5-二甲基唾卩坐-2)-2,5-二苯基四氮哇澳盐，商品名：I廡哇蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体屮的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色(或蓝色)结晶甲瓒(Forw^m)并沉积在细胞屮；在通常情况下，甲喷生成量与活细胞数成正比。二甲基亚矶(DMS0)能溶解细胞屮的中瓒，因此用酶联免疫检测仪在490nn)或570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。由于死细胞屮不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MT

6、T不会有反应。细胞凋亡是由基因编稈调控的细胞白主性白杀过稈。在细胞凋亡过稈中，细胞质浓缩，细胞核发生染色质凝聚和聚集核膜周围(边缘化)，细胞核内的染色质发生断裂，形成大小不一的片段；细胞膜出现气泡；晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体。根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种肓观、可靠的方法。对细胞凋亡进行显微观察常用的染料有Giemsa和II丫旋橙。Giemsa染色法可以使细胞核呈紫红色，细胞质为浅蓝色，在普通光学显微镜下观察凋亡过稈；叮咙橙是一种与DNA和RNA都能结合的荧光染料，在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色

7、荧光，染色后借助荧光显微镜，可以观察到细胞核的形态变化。1材料及方法：1.1材料1.1.1细胞：A549细胞(人肺腺癌细胞系)1.1.2试剂：生理盐水，95%乙醉，PBS,己配制好的各种浓度的抗肿瘤药物，吉姆萨染色液，0.01%n丫喘橙（AO）,5mg/mlMTT溶液等1.1.3仪器：荧光显微镜，显微镜，银了，培养111L,无荧光载片，盖玻片，吸水纸等1.2实验步骤1.2.1MTT法测定高三尖杉酯碱对Hela细胞增殖的抑制效果1.2.1.1作吸光度标准曲线（1）稀释细胞：用0.25%胰蛋白酶消化贴壁生长的Hela细胞,用含5%〜

8、10%胎牛血清的培养液将细胞吹打为单细胞悬液，调整细胞浓度约为5X105个/ml；取100ul加入900u1的培养液内，得到浓度约为5X104个/讷作为原初浓度的细胞。对原初浓度的细胞进行倍比稀释,分别得到细胞浓度约为5X101个/ml、2.5X1$个/ml、1