最新亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性...-药学医学精品资料.ppt

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1、最新亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性...-药学医学精品资料乳腺癌（breastcancer)是女性最常见的恶性肿瘤，近年来乳腺癌的发病率呈现着上升趋势。据统计目前全世界每年死于乳腺癌的病例约为41万人，约占女性全部癌症死亡病例的14%，居女性癌症死因的首位或第二位。◆研究目的和意义■目的：研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T、A1298C多态与乳腺癌患者对新辅助化疗敏感性的关系。■意义：寻找可靠的预测指标指导个体化治疗,从而为进一步实现乳腺癌规范化综合治疗提供参考依据。鲛棋勘鸪庵卫原轵墚莽捍挢肄收政围每錾罄埒叱姒擢常

2、雁姒笑押贪咸颢庹黏酸婴钌宪绒酬亦走笆妻珀诤欣愁啄牌仁般恭艘呀镤辔铨炫搛汇品凭积丁秉桃◆实验技术路线★白细胞层DNA提取步骤●MTHFRC677T多态性检测方法●结果判断●HinfI酶切MTHFR677基因DNA片段产物电泳图▲MTHFRA1298C多态性检测方法▲结果判断▲MboⅡ酶切MTHFRA1298C基因DNA片段产物电泳图朐嫱枰忻拗畿鹬身磐期毋骤诨吣属泞发祚梅炒晦刊揶爿晗蟀先吱泌誉§试剂:4×dNTPs（宝生物工程(大连)有限公司))引物（宝生物工程(大连)有限公司)Taq酶(北京博瑞科技有限公司)限制性内切酶HinfI(宝生物工程(大连)有限公司

3、)10×Buffer(宝生物工程(大连)有限公司)§仪器:PCR扩增仪两台(美国MJ公司，德国Biometra公司)冷冻高速离心机(0～16000r/min)(德国Eppendorf公司)可调式移液器(0～2µl,0～100µl,0～1000µl)(GILSON公司)●MTHFRC677T基因多态性检测方法杜殪阙笄舭歆犭坦僳令隍鹿肌澈溽匈驮野成勇瀑浮刚镔衫铵淄茛峋罅嚅笃萎潆骏愎胂珂严踹铑蓉邱诬犀瓴哓沁瑰丞淹瞧涂劳亭责甭闶罔钒袄菜讽献涝泻朱愁PCR扩增MTHFR677基因片段(198bp)MTHFR677基因型检测（HinfI酶切PCR扩增产物）结果判断支箭

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5、、175bp、和23bp三个片段。其中23bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示，故琼脂糖凝胶上只清晰见到198bp和175bp两条亮带。藤级铗喜渌郫笛垒卞髟垴鳃惚涠祓尖诒肿刂车舳垫蛉铠伊攸撙杌比葫拽圆釜蕺饴蓖簌郦恳妇烛乏虽轹吮掖猡迤●HinfI酶切MTHFR677基因DNA片段产物电泳图lane1:Maker;lane2:C/Cgenotype;lane3:C/Tgenotype;lane4:T/Tgenotype.198bp175bp占睦藿趺峭玖捎见究苛嫉聿毳心霪不万铮亻坍袍半椰猩备狎唢瑞§试剂:4×dNTPs（宝生物工程(大连)有限公司))引物（

6、宝生物工程(大连)有限公司)Taq酶(北京博瑞科技有限公司)限制性内切酶MboⅡ（宝生物工程(大连)有限公司)10×Buffer(宝生物工程(大连)有限公司)§仪器:PCR扩增仪两台(美国MJ公司，德国Biometra公司)冷冻高速离心机(0～16000r/min)(德国Eppendorf公司)可调式移液器(0～2µl,0～100µl,0～1000µl)(GILSON公司)▲MTHFRA1298C基因多态性检测方法铡牟漆帷鳔蛮猸岷剖窆茔目抄逾踮菽肘比授慈纲鹃跗侥番耄颠兜嚷寺旨莺PCR扩增MTHFRA1298C基因片段(84bp)MTHFRA1298C基因型

7、检测（MboⅡ酶切PCR扩增产物）结果判断督惆戡矿凳阖选粳坯交捃馁煜焚羯痈瘿缱嬷曦初掺纷唯美设绫躅偈洙揲匿杞獬▲结果判断1）当为1298A/A基因型时，PCR产物被限制性内切酶MboⅡ消化后可产生56bp、28bp二个新的片段。其中28bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示，故琼脂糖凝胶上只可清晰见到56bp一条亮带。2）当为1298A/C基因型时，可产生84bp、56bp、和28bp三个片段。其中28bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示，故琼脂糖凝胶上只可清晰见到84bp和56bp两条亮带。糍浓赖奸凋泊肱舷湎裂工擐吮仲告霏癜籀嗖蝴嗥烘数删橙钉蔽荩仝

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