最新[生物学]7生物素-亲和素免疫放大技术课件PPT.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温

2、馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅[生物学]7生物素-亲和素免疫放大技术﹡重点：生物素的理化性质与标记生物素-亲和素系统基本类型及原理生物素-亲和素系统在ELISA中的应用﹡难点：生物素-亲和素系

3、统基本类型及原理Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege概述：70年代后期在免疫酶技术中利用生物素-亲和素系统(Biotin-AvidinSystemBAS)标记抗体发展了又一种新型生物反应放大技术。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollegeDr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege亲和素（Avidin)耐热并耐受多种蛋白水解酶

4、的作用，与生物素结合后稳定性更好。每个亲和素能结合四个分子的生物素。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollegeBAS可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，也可制成亲和介质用于上述各类物质的纯化。BAS的特点：灵敏度高、特异性强、稳定性好、适用于多种反应体系。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege第二节生物素的理化性质与标记一、生物素及其活化生物素经活化后,可容易地与各种抗原、抗体、酶及核

5、酸分子中相应基团偶联形成生物素化标记物。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素的制备及特性。标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物素N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS)BNHS分子酯键中的-C=O基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键，从而使蛋白质标记上生物素Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCo

6、llege生物素的分子量较小，当与抗体或酶反应形成生物素标记结合物后，由于大分子蛋白的空间位阻效应(sterichindrance),可对生物素与亲和素间的结合以及BAS的应用效果造成干扰。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege长臂活化生物素(BCNHS)是在生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添加了两个6-氨基己糖分子基团，形成连结臂，使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响,更易发挥生物素的活性作用。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicinei

7、nXinxiangMedicalCollege(二)标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种:生物素酰肼(biotinhydrazine,BHZ)主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记肼化生物胞素(biocytinhydrazine,BCHZ)除可与蛋白质的醛基结合外，它还与N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）相同，能与蛋白质的氨基结合，因此其适用范围较BHZ宽。Dr.WangHui,FacultyofLaboratoryMedicineinXinxiangMedicalCollege（三）标记蛋白质巯基的活化生物素3－