核医学课件：第五章 体外分析技术.ppt

《核医学课件：第五章 体外分析技术.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第五章体外标记免疫分析及受体放射分析温州医科大学核医学教研室李焕斌定义以放射核素标记（或其他非放射性标记）的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。体外分析技术是结合了放射性核素的高灵敏度和特异性结合反应的高特异性的一种超微量分析技术，具有灵敏度高、特异性强、精密度好、应用面广、方法简便等优点。方法学基础结合反应遵守可逆反应的质量作用定律：k1,v1[R]+[L][RL]k2,v2定量手段放射性测量技术酶定量技术化学发光定量技术生物学基础特异性结合反应：抗原-抗体的免

2、疫结合反应；配基-受体的结合反应；底物-催化酶之间的酶促反应；结合体：抗原--抗体激素--激素结合球蛋白受体--配体体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析(RIA)免疫放射分析酶免疫分析化学发光免疫分析荧光免疫分析(IRMA)(EIA)(CLIA)(FIA)第一节放射免疫分析法(Radioimmunoassay)Dr.Yalow在体外条件下,利用Ag与定量的*Ag对限量的特异性Ab的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的一种超微量分析技术。一、基本原理Ag-Ab+A

3、g*AgAbAg++*Ag-Ab+*Ag(B)(F)*Ag与Ag免疫活性相同*Ag＋Ag>AbAg=*Ag,AgAb=*AgAbAg>*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag<*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag*AgAb*AgAbAgAb*Ag++++++++++++++++++++Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB%=B/(B+F)F%=F/(B+F)R=B/FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456浓度B%标准曲线Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB1%B2%B3%B

4、4%B5%B6%123456B%？123456789Ag0ng/ml0.1ml5ng/ml0.1ml10ng/ml0.1ml20ng/ml0.1ml40ng/ml0.1ml80ng/ml0.1ml12345678Ag0ng/ml0.1ml5ng/ml0.1ml10ng/ml0.1ml20ng/ml0.1ml40ng/ml0.1ml80ng/ml0.1ml待测10.1ml待测20.1ml*Ag0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1mlAb0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1m

5、l0.1ml0.1ml摇均匀后，放置待其竞争结合反应达平衡后分离试剂2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml测总射线（可以测2-3管求均值）去除上清液测B；也可求出F画出标准曲线从标准曲线查出待测品的Ag含量60操作基本步骤1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境也要一致。2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间不同，一般是37℃。3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和抗原－抗体复合物。4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算。二、基本方法㈠基本试剂1.抗体2.标记抗

6、原3.非标记标准抗原（标准品）2.标记抗原1）比活度和放化纯度足够高比活度——每微克抗原上标记放射性核素的千贝可数（KBq/μg）放化纯度——具有免疫活性的标记抗原占总放射性的百分数。>90%2）半衰期足够长，稳定性好3）保持原有抗原的特性大分子：125I小分子：3Hor125I3.标准抗原（标准品）化学结构、免疫活性与被测抗原相同高纯度㈡B和F的分离1、第一类2、第二类双抗体沉淀法PEG沉淀法固相第二抗体法二、基本方法+AgAb(1)Ab(2)Ab(2)Ab(1)Ag可溶性复合物可沉淀复合物试管试管分离方法的要求分离完全、快速。

7、不影响免疫反应的平衡，即是要求在分离过程中不使抗原-抗体复合物解离或形成新的复合物。受环境因素（温度、PH值等）的影响小。操作简便，分离剂来源丰富、价廉。RIA小结灵敏度高特异性好精确的定量方法操作简便第二节免疫放射分析法*Ab+Ag-*Ab+*Ab（immunoradiometricassay,IRMA）B%Ag（B）（F）在体外,利用Ag与过量的*Ab的非竞争性结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量。标记抗体，抗体是过量的。三、RIA与IRMA的比较RIAIRMA标记物抗原抗体原理竞争性结合非竞争性结合抗体量限量过量

8、标准曲线负相关正相关达到平衡的速度慢快可测范围窄宽应用对象大分子、小分子大分子IRMA和RIA低剂量区的不确定因素示意图RIA++或01IRMA+1非放射性标记免疫分析技术酶标记免疫分析技术化学发光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术一、酶标记免疫