核医学体外分析教案-北大

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1、第一节放射免疫分析—>原理(一)基本原理放射免疫分析(R1A)的基础是放射性核索标记的抗原(radionuclidelabeledantigen)和非标记抗原(unlabeledantigen)(标准抗原或被测抗原)同时与限量的特异性抗体(specificantibody)进行竞争性免疫结合反应(competitiveimmunebindingreaction),其竞争关系可用下式表示:Ag+Ab

2、Ag与Ag的免疫活性完全相同，对Ab具有同样的亲和力，当*人8和Ab为恒定量，的总量大于Ab上的有效结合点时，*Ag-Ab的形成是随着Ag量的增加而减少，剩下来的未结合或游离的*Ag则随着Ag量的增加而增加，称为竞争结合反应(competitivebindingreaction),因此测定*Ag-Ab或*人盘即可OO0^08SSS=空■■■■55••OOOOOOOOOOOOOOOOOOB3>推出被测的Ag量(图13-1)o图13-1放射免疫分析原理示意图(―)标准曲线配制一系列已知浓度的标准抗原，分别向其中加入固定量的标记抗原和抗体，反应平衡后，分离抗原的结合部分和游离部分，测

3、定*Ag-Ab的放射性B或游离*Ag的放射性F,计算出结合率B%[B/(B+F)X100%]或其他指标,如B/Bo%(Bo表示不含非标记抗原管的最人结合放射性)。以B%或B/B。%为纵座标，标准抗原的浓度为横座标，绘制曲线即为标准曲线(standardcurve)(图13-2)o依同法测得被测样品的B%或B/Bo%,即可从此标准曲线上查出样品中被测抗原的浓度。标建曲线d以B/映％为纵底你的你扈曲线b.以为(M冷祐的休厦曲线图13-2标准曲线二、基本条件一(-)特异性抗体1.抗体亲和力抗体亲和力(antibodyaffinity)是抗体与抗原之间相互作用的一种结合能力或强度。亲和

4、力大即免疫结合既快又牢固，不易重新解离。kiAg+Ab

5、曲线上查得。1.抗体特异性指抗体分别与相应抗原和抗原结构类似物的结合能力的比较。抗体与相应抗原结合能力强，而与该抗原结构类似物结合能力弱，则特异性高。抗体与抗原结构类似物的结合称交叉反应(crossreaction)0501002004008001600周知(nR/nl)交叉反应试脸交叉反应率二ED5o(B)/ED50(A)X100%(图13-4)。图13-4交叉反应试验2.抗血清滴度以免疫反应屮所需抗血清(antiserum)的稀释度的倒数来表示，稀释倍数越高，滴度(titer)越高，表示抗体的效价越高。在实际工作中要找出抗血清的最适稀释度，即与抗原比例最适当、检测抗原特异性

6、最高、标准曲线斜率最大的稀释度(图13-5)o10001600025600409600抗血材稀释倍数抗血清滴度曲线图13-5抗血清滴度曲线测定方法：将抗血清稀释成不同浓度，分别加入怕晁标记抗原，经温冇后分离B、F,求出不同稀释度的B%,以稀释度为横座标,B%为纵座标,绘制出抗血清滴度曲线(antiserumtitercurve),一般以B%为30%〜50%的抗体稀释度为最适稀释度。(-)标记抗原对标记抗原的要求：1.比活度(specificactivity):比活度越高，灵敏度越高。2.放射化学纯度(radiochemicalpurity):指具冇免疫活性的标记抗原的放射性占总

7、放射性的百分率.一般耍求大于95%O3.免疫活性：蛋白质分子上标记过多的碘原子就可能引起免疫活性的改变，一般以每个蛋口质分子上只标1〜2个1251原子为宜。4.稳定性。(三)标准品_1.对标准品的要求2.在与抗体发生反应时，应与被测物具有相等的活性和亲和力3.高度纯化4.定量精确2.标准品的级别国家标准:是高度纯化的标准品，并与各国的标准及世界卫生组织(WIIO)的标准进行过比对，作为国家的基准。药盒标准：是一般纯化的标准品，应与国家标准进行比对。质控标准：使用单位自行配置的标准品，其小抗原