核医学 其它体外分析-分子核进展

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1、其它体外放射分析含意：除RIA之外的一切体外放射分析，但它的应用有一定局限性。一、竞争蛋白结合分析（CPBA）：待分析物的结合剂：蛋白质举例：TBG甲状腺素结合球蛋白→甲状腺素CBG皮质醇结合球pro→皮质醇SHBG性激素结合球pro→皮质醇内因子结合蛋白→B12视蛋白→视黄醛蛋白激酶→CAMP、cGMP牛乳蛋白酶、叶酸还原酶→叶酸方法：竞争性与RIA相同优点：这些蛋白天然存在，来源丰富，制备简单，省时，方法学成熟易建立。缺点：①比抗体的特异性差、灵敏度也差，为了提高特异性，须在样品制备上下功夫。如纯化，清除干扰物等，不够方便。②该类蛋白种类有限，应用范围受限，已有很多被RI

2、A和IRMA取代。二、放射受体分析RRARRA与RBA的区别含义：以受体为结合剂，利用竞争结合原理对配体进行体外分析。受体的分类：膜R：一般为水溶性配体（肽类激素、儿茶酚胺等）胞内R：（浆or核），一般为脂溶性的配体（甲状腺素，类固醇）受体样品的制备：与RBA相同。标记品的要求：要求配体标记前后生物活性不受影响。因为标记配体在RRA时活性往往是降低的。如125I标上一个不影响，如果有二个125I标上就有变化了。RRA的优点：1、R与L的结合反应快、瞬间完成、比RIA出结果快。2、能反应L的生物学活性。如冬眠灵有多种衍生物，它们均能与特异抗体结合，但只有有生物活性的衍生物才能与

3、受体结合，这种测定反应L的生物学活性，而不是免疫活性。所以研究物质结合与功能RRA占有相当的地位。RRA的缺点：1、灵敏度比RIA小10—100倍，这是因为不同组织间得来的受体对配体的亲和力有差异，又难以寻找高亲和力的受体。2、反应条件和环境严格，离子强度，温度、PH值要求高。3、NSB结合容量大，亲和力又小，NSB较大临床应用：1、利用受体来测体内配体的含量。2、测定体内抗受体抗体的量。有些疾病发现体内存在着抗R的抗体（自身抗体），如Gtrave’sdisease(TSH、甲状腺素R的抗体)；InsulinB型抗症（InsR-Ab）、重症肌无力（乙酰胆硷受体抗体）。这类受体

4、的抗体有两类特征：1、受体结合部位抗体（R—Ab）：当R与Ab成复合物时，复合物中的R可再与配体结合，即R的结合位点保留，但复合物却抑制配体与单独存在的游离R相结合。2、受体非结合部位抗体（Ab）：它的特征是复合物对配体与R的结合无抑制作用。三、酶的放射分析（REA）1、酶的活性（力）分析概念：酶活性（力）：指酶催化加速反应的能力。表示法：浓度/时间（反应酶促反应速度的快慢）酶的反应速度，可以是底物的消耗量或产物的生成量单位：Kat：（催量）指在规定条件下，每秒钟酶催化1mol底物转变所需要酶的量。旧单位：U；1U=16.67kat符号：底物用S表示，S*指标记的底物酶用E表

5、示P产物反应式：*S+EE*SE*P*P+E经过一般时间，从反应液中分离出*P，测放。*P的CPS酶活性（力）的计算（kat）=---------------------SA·t·e*P的CPS酶的比活力（kat/g）=---------------------SA·t·e·w可知以下几个量：t（分）：*P的放射性CPS；SA标记物的比活度；e仪器效率；W参加反应的酶的蛋白量（mg）。优点:1、灵敏度高（放射性标记品）2、特性性强，由酶的专一性决定。3、适用广，绝大多数酶可用此法。缺点:1、需高质量的定位标记物2、分离方法复杂，难以自动化。酶液制备：标记物制备与选择PH、激活

6、或抑制剂的使用、温度、时间等（自学）2、酶促同位素衍生物分析：实际上分析底物含量。反应：标记试剂+待测底物标记衍生物E举例：32P—rATP+胆硷[32P]一磷酰胆硷+ADP激酶胆硷衍生物的放射性强弱标记试剂比活度可计算待测物量（底物）注意：需要知道一个分子待测物能与标记试剂结合的分子比。如果用双同位素标记可以更准确。3、酶的激动剂和抑制剂测定法：原理：激动或抑制剂可加快或减慢酶促反应的速率，用系列浓度的激动或抑制剂与酶进行定时反应，分离产物测放射性，可计算出激动剂或抑制剂的量。如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脱羧基产生Co2，14C标记酪氨酸经磷酸吡哆醛作用产生14Co2，可计算磷酸

7、吡哆醛的量。4、放射酶促饱和分析法：与酶的底物分析相同该法类同RIA的竞争，不同之处是E不断从E*S和ES中释放出来而再去与S反应，如果反应时间足够长，因*S与S为同一物，会均被转化为产物，失去竞争之间的函数关系，所以不能象RIA那样等待反应平衡，而应该在一定时间就得分离测定。这是它的关键（特点之一）5，ELISA：固相酶标记-免疫分析待测抗原固相化，然后与酶标记的抗体结合形成复合物，最后不测放射性而是让酶显色计算物质含量。6、整体酶活力测定及应用二氧化碳呼气试验：用14C或13C等标记酶的底物，如经过