体外分析课件核医学科

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1、体外分析福建医科大学附属第一医院核医学科黄毅相1体外分析技术是利用放射分析方法或其派生的相关非放射分析技术测定生物样品中微量生物活性物质含量的一类分析法。主要用于测定样品内的激素、抗原或抗体、受体容量、药物浓度以及其他生物活性物质。一、定义体外分析2体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析(RIA)免疫放射分析(IRMA)酶免疫分析(EIA)化学发光免疫分析(CLIA)荧光免疫分析（FIA）二、分类3★放射分析方法或其派生的相关技术。★在体外进行机体内物质种类和含量的分析测定。★测定对象是患者血清、血浆或其他体液样品内的激素、抗原、抗体

2、、药物浓度和其它生物活性物质等。★商品化试剂盒的应用（如北方所、原子高科）。4三、发展45★多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。★检测自动化（罗氏、西门子、雅培、贝克曼雷度、新产业等全自动免疫分析仪）。★实现多个待测物同时检测，如时间分辨荧光免疫分析。发展56★在临床和基础医学研究上应用极为广泛。如内分泌学、肿瘤学、免疫学、病毒学、药理学、血液学、消化病学、神经病学、妇产科学等被广泛应用，有力地推动了医学科学的发展。发展6放射免疫分析radioimmunoassay,

3、RIA7一、RIA定义放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是指用放射性核素标记已知的抗原或抗体来测定未知的抗体或抗原的体外微量分析方法,它结合了放射性核素的高敏感性和抗原抗体反应的高特异性。8二、RIA的基本原理利用放射性核素标记的抗原（*Ag）和非标记的待测抗原（Ag）竞争结合其特异性抗体（Ab），反应达到平衡后，分离并分别测定结合的抗原抗体复合物（Ag.Ab）的放射性（B）和游离抗原放射性（F）。由于B或B/B+F与非标记抗原的含量之间存在竞争抑制的函数关系，依据这一函数关系，通过已知浓度的标准品绘制出标准曲线即可求出非标记抗原（待测样品）含量。9基本原理Ag

4、-Ab+Ag*AgAbAg++*Ag-Ab+*Ag(B)(F)*Ag与Ag免疫活性相同*Ag＋Ag>Ab*Ag与Ab的量恒定Ag=*Ag,AgAb=*AgAbAg>*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag<*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)10三、RIA试剂盒组成RIA分析所需的基本试剂有抗体、标记抗原（125I标记)非标记标准抗原（标准品），此外试剂盒中还提供分离试剂，缓冲液及质控品等。11四、标准曲线的绘制用一系列已知呈梯度浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F；分别测量B和F的放射性；用反应变量（

5、如B%）作为纵坐标，反应剂量（即一系列标准抗原的浓度）作为横坐标绘制一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线即标准曲线。12Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB%=B/(B+F)F%=F/(B+F)R=B/FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456浓度13B%标准曲线14五、未知样品的测量在同等条件下，用待测抗原与一定量的标记抗原与限量特异性抗体发生反应，并用同样的方法分离待测抗原的B和F，测量其放射性，计算出B%，在标准曲线上就可以查出对应的抗原浓度。15B%60标准曲线及未知样品测定16六、操作基本步骤RIA的操

6、作一般包括加样、孵育、分离、测量和数据处理5个部分。加样：注意所有的试管加样总体积要保持一致，所处的介质环境也要一致。孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间不同，一般是37℃。分离：选择好的分离方法进行分离。测量：测量游离或结合物部分的放射性。数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算。17RIA的优点灵敏度高：一般化学分析法的检出极限为10-3～10-6g，而RIA通常为10-9(ng)、10-12(pg)，甚至10-15(fg)、10-18(ag)特异性强：RIA是基于抗原抗体免疫结合反应，由于抗原抗体免疫反应专一性强。应用范围广：几乎能应用于所有激素的分析（包括多肽类和固醇类激

7、素），还能用于各种蛋白质、肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原、寄生虫抗原以及一些小分子物质和药物（如地高辛、毛地黄甙等）的分析。操作简便，商品化程度高181.125I半衰期短（60天），试剂不稳定2.反应时间长，操作难以自动化。3.使用放射性核素，对人体有一定的危害性。放射免疫分析有被取代的趋势。RIA的缺点19非放射性标记免疫分析技术酶标记免疫分析技术化学发光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术20一、酶标记免疫分析技术用酶分子代替放射性核素标记抗原或抗体，进