检验核医学系列课件-体外分析

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1、第六章体外分析重庆医科大学彭志平1定义以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。2放射分析方法或其派生的相关技术在体外进行机体内物质种类和含量的分析测定。测定对象是患者血清或其他体液样品内的激素、其它生物活性物质和药物浓度等。3发展1956年Berson和他的同事们偶然地观察到131I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定的相关关系，而建立了放射免疫分析法，对医学的发展起到了划时代的推动作用，于1977年获得诺贝尔医学奖。4几乎

2、是在同一时期，Ekins和Murphy用自然存在在血液里的激素结合球蛋白（hormone-bindingglobulins）建立了竞争性蛋白结合分析方法(competitiveproteinbindingassays,CPBA)，测定甲状腺素(T4)和皮质激素。5多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围商品化试剂盒的应用检测自动化实现多个待测物同时检测，如时间分辨荧光免疫分析6使体外分析技术在临床和基础医学研究上应用极为广泛。如内分泌学、肿瘤

3、学、免疫学、病毒学、药理学、血液学、消化病学、神经病学、妇产科学等被推广应用，有力地推动了医学科学的发展。7体外分析技术建立的基础:以配体和结合体的特异性结合反应为共同的生物学基础以结合反应动力学规律作为共同的方法学基础以放射性等的测量技术作为共同的定量手段8生物学基础：特异性结合反应配体-结合体抗原-抗体的免疫结合反应；配基-受体的结合反应；底物-催化酶之间的酶促反应；激素-激素结合球蛋白的结合反应9方法学基础：结合反应动力学规律遵守可逆反应的质量作用定律：k1,v1[L]+[R][RL]k2,v210定量手段(标记配体作为示踪剂)放射性测量技术酶定

4、量技术化学发光定量技术荧光定量技术11体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)免疫放射分析酶免疫分析化学发光免疫分析荧光免疫分析(immunoradiometricassay,IRMA)(EIA)(CLIA)(FIA)分类:12放射免疫分析radioimmunoassay,RIA13放射免疫分析法是Yalow和Berson于1960年在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。结合了放射性核素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。Dr.Yalow14一、RIA的

5、基本原理（一）竞争抑制结合反应：放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。15基本原理Ag-Ab+Ag*AgAbAg++*Ag-Ab+*Ag(B)(F)*Ag与Ag免疫活性相同*Ag＋Ag>AbAg=*Ag,AgAb=*AgAbAg>*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag<*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)16Ag*AgAb*AgAbAgAb*Ag+++++++++++++++++++++Ag17（二）剂量反应曲线：标准曲线标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应

6、曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。18标准曲线的绘制方法用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F；分别测量B和F的放射性；用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。19Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB%=B/(B+F)F%=

7、F/(B+F)R=B/FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456浓度20B%标准曲线21未知样品的测量在同等条件下，用待测抗原与一定量的标记抗原与限量特异性抗体发生反应，并用同样的方法分离待测抗原的B和F，测量其放射性，计算出B/F，在剂量反应曲线上就可以查出对应的抗原浓度。22Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456B%？23B%F%B/FCalibrationCurve6024在实际的操作中，一般要设立：最大结合管（Bo）：标准抗原的量为0，只有标记抗原和特异性抗体时，标记抗原

8、与抗体充分反应后分离B和F，所测得的B的放射性为Bo。这是没有标准抗原与之竞争时，标记抗原和抗