核医学体外放射分析

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1、体外放射分析分类：1、 竞争性：放射免疫分析RIA竞争性蛋白结合分析CPBA放射受体分析RRA放射酶分析放射微生物分析2、非竞争性：免疫放射分析IRMA一、放射免疫分析RIA原理：P62竞争机制：Ag(不定量)+Ab（有限量）固定量*Ag免疫结合反应形成免疫复合物定量分析的数学基础：免疫结合反应服从质量作用定律P+Q===PQ[PQ]K=---------[P][Q]K值大表示亲和力大由质量作用定律推导的数学模型[Q0]1[Q0]B2—B（1+------+--------）+-------==0[P0]K[P0][P0][PQ]B==----------×100%P0=Ag

2、+*AgPQ=*Ag—Ab[P0]Q0=Ab的初始含量当*Ag为固定量时，P0为自变量（实际为Ag）P0与复合物B呈一定的函数关系放免反应的定量依据：剂量反应曲线或叫标准曲线剂量反应曲线的含义以已知的标准品为横坐标，以放射性复合物测定值的某种表达式做纵坐标，绘制剂量---反应曲线P64图4—1P74图4—13曲线的斜率是关键因素，斜率不同精密度不同（P64图4—1）斜率=tgα（代表曲线或直线的倾斜度）影响斜率的常见因素有以下几点：1、Ab亲和力：K大，斜率也大2、Ag用量：Ag少，斜率大3、Ag的免疫活性：活性强，斜率大4、*Ag的比活度和放化纯度：↑→↑5、Ab用量：B=

3、33—50%斜率最大。6、反应条件和温度（见后）免疫反应条件要求：1、PH：大多PH=7.52、离子强度：常用0.05—0.1M3、反应温度：实验确定RIA方法学1、操作步骤：P1942、RIA的基本试剂标准抗原基本要求：①标准抗原与待测物免疫性必须一致②必须高纯度：不纯不能制备抗体，不纯标记物放化纯度达不到要求③标准抗原的量必须准确：（用于标准曲线）④具有良好的稳定性（能保证较长时间不改变性能）标准抗原的用途：①制备抗体②制备*Ag③标准曲线抗血清检查抗血清的指标：1、亲和常数KP1922、交叉反应率P1933、滴度标记抗原Ag*基本要求：①免疫活性与待测物及标准品一致②适

4、度的比活度：太高、化学量少、不具竞争性，太低统计误差大。③足够高的放化纯度（>95%）免疫活性检验：复合物放射性最大结合百分率（B%）=-----------------------------------×100%参与反应标记抗原放射性分离方法非特异分离法：吸附法（活性炭）层析电泳法过滤法磁性分离法沉淀法（聚乙二醇，硫酸胺等）特异分离法：双抗法固相分离法葡萄球菌A蛋白（SPA）补充：对分离方法的基本要求1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开2、分离的成份便于放射性测量3、分离效果不受外界干扰因素的影响4、操作简便、分离迅速、重复性好5、与游离标记物的非特异结合尽可能小6、试

5、剂来源广泛，经济价廉RIA加样方法1、平衡法：三种反应物同时加样优：简便易掌握重现性好竞争反应较典型缺：灵敏度不高2、顺序加样法：Ag+Ab温育后再加*Ag优：标准曲线起始段斜率高、灵敏度高缺：曲线工作波度范围窄、重现性差3、一天法：（特殊情况下使用）样品采集与保存应注意的几个问题①用原样品、新鲜样品、减少存放、最好不纯化、浓缩萃取、减少变异②尽快做实验，避免反复冻融③尽可能少用添加剂等，抗凝剂也少用。RIA数据处理的数学模型（补充概念）后页放射免疫法的数学模型及处理常用符号及英文缩写的含意：NSB：非特异结合B0%：B0管的放射性测量值与加入总放之比。BQC：质控探样品测量

6、值CPMBN：NSB管的样品测量值CPMF：游离物质样品测量值CPMB：结合的沉淀物样品测量值CPMED50：指B/B0为50%时对应剂量值。ED25、ED70指B/B0为25%、70%所对应的剂量。曲线模型分类1、针对剂量反应的实际曲线模型：如多项式函数，光滑样条函数，线性内插模型2、直线化模型：（logit—log模型）常用：将标准曲线横坐标各点取对数lgX而纵坐标用logitBx/B0,logitBx/B0=lgBx/B0—Bx该直线法标准曲线的零点丢失（零无对数）造成灵敏度降低3、logistic模型：只能用于平衡反应两点改进a：横坐标不取对数而用Db：不做NSB，靠

7、计算机计算拟合扣除NSB。a—d模型：Y=------------------+dx1+(------)bc有四个参数：a=B0（也称四参数logistic模型）c=ED50b=logit—log直线斜率d=NSB4、五参logistic数模型：a—bY=---------------+dx[1+(----)b]Ec引入了一个不对称因子E。E计算机能求出。可用于非平衡反应系统5、四参数单位点质量作用定律模式：按质量作用定律导出的模式优点：①质量作用定律，稳健回归拟合；②适于平衡和非平衡系统；③个别坏点对