浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理

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1、浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理使用化学键合有机固定相的反相高效液相色谱已成为液相色谱中最重要的方法，在所有要进行分离分析的化合物中，有三分之二可用之来完成。反相液相色谱最初是用来分离非极性和非离子型化合物的。随着研究的不断深入，实践证明，将流动相的组分进行调节，往水溶性流动相中加入适当的缓冲液或有机改性剂，即控制流动相的二次化学平衡，能使大多数极性和离子性化合物在反相色谱中获得成功的分离；除对保留和选择性进行

2、控制外，还可靠抑制干扰竞争平衡或副反应来改善峰形。一、缓冲液的使用及离子抑制大量实验结果证实，对弱酸、弱碱这些在水溶性溶液中易发生离子化的样品进行分离时，最简便的方法就是用缓冲液来调节流动相的pH值,亦即对离子化过程进行抑制，所以此方法被称为“离子抑制”(lonSuppress)，且离子抑制最有效范围是在pH3—8。由于ODS柱的化学不稳定性，在pH1.5—8范围之外，固定相会发生降解，所以对pKa小于2或大于7的化合物就不适宜用缓冲液来抑制离子化。但近年来HPLC迅速发展，使用化学性质更为惰性的大孔

3、聚合物（苯乙烯—二乙烯苯）固定相，使得流动相使用的PH范围达到1—13,因而离子选择性的优点也可用于强酸和强碱的分离。浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理使用化学键合有机固定相的反相高效液相色谱已成为液相色谱中最重要的方法，在所有要进行分离分析的化合物中，有三分之二可用之来完成。反相液相色谱最初是用来分离非极性和非离子型化合物的。随着研究的不断深入，实践证明，将流动相的组分进行调节，往水溶性流动相中加入适当的缓冲液

4、或有机改性剂，即控制流动相的二次化学平衡，能使大多数极性和离子性化合物在反相色谱中获得成功的分离；除对保留和选择性进行控制外，还可靠抑制干扰竞争平衡或副反应来改善峰形。一、缓冲液的使用及离子抑制大量实验结果证实，对弱酸、弱碱这些在水溶性溶液中易发生离子化的样品进行分离时，最简便的方法就是用缓冲液来调节流动相的pH值,亦即对离子化过程进行抑制，所以此方法被称为“离子抑制”(lonSuppress)，且离子抑制最有效范围是在pH3—8。由于ODS柱的化学不稳定性，在pH1.5—8范围之外，固定相会发生降解

5、，所以对pKa小于2或大于7的化合物就不适宜用缓冲液来抑制离子化。但近年来HPLC迅速发展，使用化学性质更为惰性的大孔聚合物（苯乙烯—二乙烯苯）固定相，使得流动相使用的PH范围达到1—13,因而离子选择性的优点也可用于强酸和强碱的分离。关于离子抑制的机理还未确切了解，目前认为有两个主要原因，第一，认为流动相中的缓冲液与被分析样品相互反应，使得样品的离子平衡向“中性”形式移动，这就易于在反相柱上进行色谱分配。当PH值低于某弱酸的PKa时，则其保留时间就长（抑制了离子化），反之，当pH值高于PKa时，洗脱

6、就快；碱性样品正好相反。PH值高于PKa，保留时间则长，PH值低于pKa，洗脱就快。之所以样品的离子形式比中性形式洗脱较快是因为离子形式更易溶于水溶性流动相。上述机理是离子化的控制。第二种解释是缓冲调节剂使得表面残留硅醇基与样品的相互作用减到最小，这是因为缓冲调节剂能“复盖”这些硅醇基团，阻止其吸附样品分子和参与离子样品的保留。尤其是磷酸盐缓冲液，其作用机理可能就属于后者。二、离子对色谱离子对技术在很多情况下可代替离子交换用于分离离子化合物。此方法现已能够对大量化合物（包括生物胺、药物及其代谢物、染料

7、、羧酸等）进行有效分离。现代离子对液体色谱可归为几类：1．正相离子对分配色谱，将会有离子对试剂的水溶液涂布在硅胶上，用有机溶剂流动相洗脱化合物；2．反相离子对分配色谱，固定相为非极性表面（如C8或C18），分离酸时在水溶性流动相中加入有机碱（如磷酸四丁铵），分离碱时可加入有机酸（如辛基磺酸）。因为用离子交换法分离中性和离子样品时并非都令人满意，而用离子抑制法分离离子化合物也有困难，所以反相离子对色谱已广泛用于分离带不同电荷的化合物。离子对色谱的保留机理一直难以确定。目前有三种假设，其中的两种提出了较极

8、端的情形，而且各自都包罗了数量可观的色谱数据，它们分别是离子对模式和动力学离子交换模式，第三种观点则是离子相互作用机理。离子对机理强调，被分离化合物与流动相中的相反离子形成离子对，然后这一不带电荷的离子对分配进入亲脂性固定相中，经理论推导认为，被分离化合物的保留是由离子对的结合力及相反离子的浓度决定的。离子对越易溶于亲脂性固定相，流动相中相反离子浓度越高，则保留时间越长。然而有些实验结果都表明，对于某些相反离子，超过一定浓度，则保留时间反而会减小。离子交