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《胆汁酸反相高压液相色谱中的离子对探针检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、研究报告胆汁酸反相高压液相色谱中的离子对探针检测达世禄J．Vialle（武汉大学化学系）（法国科学研究中心分析服务中心）〔提要〕用具有紫外吸收离子对试剂的反相色谱系统，分离和检测无紫外吸收的游离胆汁酸及其丁二酸衍生物，样品组份洗出正峰或反峰，决定其相对系统峰的保留值。研究了流动相组成，离子对试剂及浓度、pH值等对保和响应的影响，确定胆汁酸最佳分离和检测条件。近十年来，离子对高压液相色谱得到迅速发展，它逐步取代离子交换色谱，成为分析有机酸，碱性化合物的有效色谱技术〔1-3〕。新近出现的离子对探针检测，以疏水性的紫外吸收平衡离子作为离
2、子对探针，使非紫外吸收化合物在紫外检测器上产生响应，这是液相色谱检测技术的新发展〔4-5〕。游离胆汁酸在波长240nm以上紫外区无吸收〔6〕，欲进行高压液相色谱分离和测定，常需制备成具紫外吸收的衍生物〔7〕，或用205nm低波长紫外检测器，才能获得较高响应〔8〕。实验仪器：液相色谱仪是具有420程序控制器（AltexScientific的800溶剂系统，装20微升样品管的Rheodyne71-25型高压进样阀(U.S.A.),PyeUnican(England)或SPD-2AJapan）可变波长195-350nm紫外检测器。色谱柱
3、150×4.6毫米。固定相NucleosilC18(5μ(MachereyNagel,Germany)，用四氯化碳作悬浮剂，异辛烷作淋洗剂，高压匀浆装柱。试样：每一家私人公司赠送的游离胆汁酸及丁二酸衍生物：胆（汁）酸，即3,7α12-三羟基-5β-胆酸（CholicAcid,CA），脱氧胆酸（DeoxychlicAcid,DCA），鹅脱氧胆酸（ChenodeoxycholicAcid,CDCA),熊脱氧胆酸（Ursod'eoxycholicAcid,UDCA），猪脱氧胆酸（hyodeoxycholicAcid,HDCA，石胆酸（L
4、ithoch-olicAcid,LCA，7-氧胆酸，即7-氧,3,12-二羟基胆酸（7-OC，3，12一氧胆酸(3,12OCA),3一氧胆酸（3-OCA，3-丁二酰，7-氧胆酸（SOCA，3，丁二酰脱氧胆酸（SDCA，丁二酰石胆酸（SLCA。溶剂和试剂：甲醇，HPLC用（Prolabo,France。水，去离子水在石英蒸馏器内蒸馏，通过0.45微米醋酸纤维滤纸（Millipore,U.S.A过滤。Hyaminelb22diisobutylphenoxyethoxyethyl)dimethylbenzylammiumChloride
5、,Hy〕苄基，三丁基溴化铵(BTBA)苄基，三甲基溴化铵(BTMA)，三者均系F1ukaAG(Buches,Switzerland）产品。四丁基硫酸氢铵(TBA,Sigma,U.S.A.)色谱方法：将一定体积甲醇和含有离子对试剂的水溶液混合配制流动相，水溶液以磷酸盐—磷酸缓冲液调到所需pH值，流动相组成均以体积比表示。流动相通过0.45微米Fluoropori滤纸（FH，Millipore,U.S.A.）过滤，使用前在超声波浴内脱气。流动相流速1毫升／分。未说明者，检测器用254毫微米。样品均溶于流动相。结果和讨论（一）色谱前缘峰
6、和系统峰：液相色谱中，由于流动相中某一成分或杂质所形成的正或反色谱峰，称为空穴峰（Vacantpeak9。实验表明，流动相中含有Hy或BTBA等紫外吸收离子对试剂的色谱系统，一般有两个空穴峰。图1是流动相含BTBA的空穴峰色谱图。含Hy的流动相，具有相似空穴峰。第一个空穴峰均具有相同保留值，这是由于峰1是由水溶性离子（OH-，Cl-，Br-）或溶剂形成的。我们称它为前缘峰（F）；而由疏水性季铵离子形成的第二个空穴峰，称为系统峰（S。峰F和S同样具有离子性质，因此，两者均影响样品组份色谱峰方向。色谱系统峰的数目，决定于色谱系统中离子
7、对试剂的数目，只要流动相中有一种离子对试剂具有紫外吸收，那么其他非紫外吸收离子对试剂均可显示相应系统峰。图2是流动相含有BTBA和TBA色谱系统的F峰和S峰。（二）影响胆汁酸保留的因素：胆汁酸及其丁二酸衍生物的保留值（以k'表示）与流动相中离子对试剂浓度和性质的关系如图3，4所示。胆汁酸保留随BTBA浓度增加而增加，而BTBA保留值随BTBA浓度增加而降低。这表明，离子对试剂与溶质离子间电荷作用是决定溶质保留的重要因素。图4说明，Hy对胆汁酸保留的抑制作用明显高于BTMA和BTBA。遵从一般反相离子对色谱规律，流动相组成和pH值均
8、影响胆汁酸保留。由于pH值对有机酸、碱保留值影响不同〔2〕，因此，调节pH是控制胆汁酸和系统峰相对保留的重要因素。（三）样品组份色谱峰洗出方向：S.Chill等研究过离子对探针检测色谱系统中，组份洗出正峰或反峰的规律〔4。图5是胆酸CA，CDC、L
