反相离子对液相色谱测定葡萄糖化学氧化过程中的6种有机酸_朱璇

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1、第32卷第5期分析试验室Vol.32．No．52013年5月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2013－5反相离子对液相色谱测定葡萄糖化学氧化过程中的6种有机酸*朱璇，余作龙，周佳栋，姚琴，曹飞，韦萍(南京工业大学生物与制药工程学院，南京210009)摘要:建立了反相离子对液相色谱同时测定葡萄糖氧化产物:葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乙醇酸、乙酸、葡萄糖二酸及酒石酸含量的方法。采用kromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μ

2、m)，流动相为10mmol/LK2HPO4－10mmol/L四丁基硫酸氢铵(pH7.2):甲醇(95:5，V/V)，检测波长210nm，流速0.7mL/min，进样量20μL。6种有机酸在线性范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系;回收率为92.7%～107.0%;RSD(n=5)为0.9%～6.3%。20min内即可将6种物质分开。对葡萄糖化学氧化过程检测表明，HNO3氧化法反应剧烈，除了生成葡萄糖酸、葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸外，还生成碳-碳键断裂的副产物如酒石酸、乙醇酸等，而TEMPO法反应较为温和，并未发生碳-碳键断裂。关键词:离子对液相色谱;葡萄糖氧化

3、;有机酸;葡萄糖二酸中图分类号:O657.7文献标识码:A文章编号:1000-0720(2013)05-020-05葡萄糖二酸是含有多羟基的二元酸，被美国能佳;还有文献通过气相色谱分析了葡萄糖二酸及其源部确定为“最具有价值的生物炼制产品”之一，副产物，但气相色谱样品需衍生处理，操作较复［6］广泛应用于医药、食品添加剂、环境治理和生物基杂;由于葡萄糖氧化产物及其副产物均为酸性［1］聚合物等方面，受到研究者的广泛关注。目前，物质，极性较大，在反相柱上停留时间过短，难以葡萄糖二酸的制备主要是通过葡萄糖氧化，包括化分开。学氧化法如浓硝酸氧化、以2，2，6，6-四

4、甲基哌啶氧本实验选用kromasilC18色谱柱，磷酸盐缓冲［2～5］化物(TEMPO)为催化剂的共催化氧化以及生液中加入适当的离子对试剂作为流动相测定葡萄物发酵法等。其中，化学氧化法操作简单，反应迅糖化学氧化过程中的6种有机酸。对离子对试剂［6］速，但制备过程中会产生大量的副产物。选择、浓度、流动相组成及其pH等分离条件进行已有报道以H2O2为氧化剂，乙酰丙酮为催化了优化，并对葡萄糖硝酸氧化法和TEMPO氧化法剂制备和检测葡萄糖二酸，但并没有对副产物进行制备葡萄糖二酸过程进行了检测。［7］检测，文献［8］比较了AminexHPX-87H以1实验部分5m

5、mol/L的H2SO4溶液做流动相和PrevailOA以1.1仪器与试剂pH2.5的磷酸缓冲盐溶液做流动相时检测葡萄糖Ultimate3000系列高效液相色谱仪(美国氧化制备葡萄糖二酸的副产物，但产物分离效果不Dionex公司);Kromasil100－5型C18色谱柱(大连收稿日期:2012-09-29基金项目:国家自然科学基金项目(21106063，30900009)与江苏省自然科学基金项目(BK2010557)资助E-mail:zxuan7@163．com—20—第32卷第5期分析试验室Vol.32．No．52013年5月ChineseJourna

6、lofAnalysisLaboratory2013－5伊利特公司);葡萄糖二酸单钾盐;葡萄糖醛酸;葡择加入离子对试剂与被测离子形成中性的离子对萄糖酸;其余有机酸均为国产分析纯试剂。化合物，使其在非极性固定相中溶解度增大，结果1.2色谱分析条件分离效果显著提高(图1b)，其中，四丁基硫酸氢铵HypersilODS2色谱柱(250mm×4.6mm5μm);较其他离子对试剂效果好，并且没有溴离子干扰，检测波长210nm;流动相为10mmol/LK2HPO4－10因此，后

7、续实验中均选择四丁基硫酸氢铵为离子对mmol/L四丁基硫酸氢铵(pH7.2):甲醇(95:5，V/V);试剂。进样体积:20μL;流速:0.7mL/min。固定其他条件不变，考察离子对试剂四丁基硫1.3对照品混合标准溶液酸氢铵浓度在5～50mmol/L范围内变化时对分离称取葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乙醇酸、乙酸、葡度的影响。结果表明离子对试剂浓度的增加对混合萄糖二酸单钾盐、酒石酸各100mg，用流动相溶解样保留时间的影响不大。考虑各物质的峰形和出峰并定容于10mL容量瓶中，配制成10g/L的标准混时间，选择四丁基硫酸氢铵的浓度为10mmol/L。合溶液。再用

8、流动相将标准溶液分别稀释至0.2，2.1.2流动相pH和甲醇比例的选择固定其他0