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1、离子对反相液相色谱在硒形态分析中的应用1硒形态分析的意义W是人体必需的14种微暈元素之•一，是脑和内分泌组织中一种特别重耍的基木营养元素，所有具备祌经系统的动物都具有硒依赖的酶。这些酶利用硒化半胱氨酸实现重要的抗氧化和还原控制功能。它们的功能是必不可缺的，特别足大脑组织需要其抵抗活性氧的代谢物产生的氧化损伤。缺硒会导致能量缺乏性营养不良、关节炎、克山病（大骨节病）、肝损害等。另一方血，食入过量的砸可能导致急性中毒症状（心律不整、溶血、肝脏坏死、肺部水肿、脑水肿等，严重者可能死亡）或慢性症状（如肓目
2、蹒跚症和碱性病）。硒的毒性和生物利用度很大程度上取决于硒的形态，例如，与氨基酸和蛋白质结合的有机硒的毐性低于无机硒。因此，无论对于食品、环境样品，还是硒暴露人员或硒屮毒患者的体液，硒形态分析和监测都是很有必要的。[1]2生物体内硒的主要形态结构生物体内硒的主耍形态见卜*表：[1]硒物种亚硒酸盐(selenite，SeIV)pKa2.4,7.9硒酸盐(selenate,SeVI)pKa<0,1.7硒代蛋氨酸(selenomethionine,SeMet)pKa2.6,8.9离子对反相液相色谱在硒形态
3、分析中的应用1硒形态分析的意义W是人体必需的14种微暈元素之•一，是脑和内分泌组织中一种特别重耍的基木营养元素，所有具备祌经系统的动物都具有硒依赖的酶。这些酶利用硒化半胱氨酸实现重要的抗氧化和还原控制功能。它们的功能是必不可缺的，特别足大脑组织需要其抵抗活性氧的代谢物产生的氧化损伤。缺硒会导致能量缺乏性营养不良、关节炎、克山病（大骨节病）、肝损害等。另一方血，食入过量的砸可能导致急性中毒症状（心律不整、溶血、肝脏坏死、肺部水肿、脑水肿等，严重者可能死亡）或慢性症状（如肓目蹒跚症和碱性病）。硒的毒性
4、和生物利用度很大程度上取决于硒的形态，例如，与氨基酸和蛋白质结合的有机硒的毐性低于无机硒。因此，无论对于食品、环境样品，还是硒暴露人员或硒屮毒患者的体液，硒形态分析和监测都是很有必要的。[1]2生物体内硒的主要形态结构生物体内硒的主耍形态见卜*表：[1]硒物种亚硒酸盐(selenite，SeIV)pKa2.4,7.9硒酸盐(selenate,SeVI)pKa<0,1.7硒代蛋氨酸(selenomethionine,SeMet)pKa2.6,8.9甲基硒代半胱氨酸(Selenomethylselen
5、ocysteine)硒代胱組酸(selenocystine,SeCys2)pKa2.4,8.9硒代半胱氨酸(selenocysteine)(丫-谷氨酰基甲基硒代半胱氨酸：丫-glutaniylselenomethylselenocysteine)Trimcthylsclcnonium,TMScf(CH3)3Se+3离子对反相-高效液相色谱由上表可见，-•种理想的对生物体内的硒进行形态分析的方法最好能够在一根柱子上同时分离检测尽可能多的阴离子、阳离子和中性分子的硒物种。很多研究都选择了离子对反相高效
6、液相色谱（reversephase-ionpairingchromatography）一一种特戏模式的反和液和色谱。离了•对色谱由GordonSehili博士于1973年建立，其方法是将离子性化合物添加到流动相屮以促使离子与带电荷分析物形成配对离子，从而提高分离度。这些试剂由带有可离子化终端的烷基链组成。当在反相条件下用于常见的憎水性HPLC固定相时，离子对试剂可选择性的增加带电荷分析物的保留吋间。离子对色谱的优点在于：（1）缓冲液制备简单；（2）碳链长度选择众多，可用于培加保留时间、改善分离性质
7、；（3）显著缩短分离时间；（4）同时分离离子化和非离子化分析物；（5）有效改善峰形。主要缺点是对色谱柱伤害较大，分析完成后需耍较长吋阆冲洗柱子，除去离子对试剂，以及实验条件不稳定。离子对试剂的浓度与其样品的保留时间有直接的影响,而且离子对试剂对pH値比较敏感，配制流动相时要求精确度较高。否则宵接影响实验的重复性和重现性。三氟乙酸（trifluoroaceticacid,TFA）和七氟丁酸（heptafluorobutanoicacid,HFBA）是硒形态分析最常用的离子对试剂。五献丙酸(penta
8、fluoropropanoicacid,PFPA),TBAA,氢氧化网K基按(tetrabutylammoniumhydroxide,TBAH)的使用口」见于报道。4用于硒形态分析的离子对反相-高效液相色谱优化离子对试剂的选择取决于分析条件卜*分析物的形态。例如，如粜分析物是阴离子性的，则应选择阳离子离子对试剂。如文献［2］就选择TBAH为离子对试剂分析Y亚硒酸盐、硒酸盐、硒代蛋氨酸（SeMet）和硒代胱氨酸（SeCys2）四个硒物种（同时还可分析四个砷物种）。由表中可见，上述四个
