水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用.pdf

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1、中国摩学迢搪2012，28(30)：1—5ChineseAgriculturalScienceBulletin水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用杨靓，邓萍，王开放，刘妍，刘小娟，吴祖建(福建农林大学植物保护学院／福建省植物病毒学重点实验室／福建农林大学植物病毒研究所，福州350002)摘要：为了进行水稻草状矮缩病毒(Ricegrassystuntvh'us,RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的基因，并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载

2、体转化EcogRoseRa，经IPTG诱导后获得分子量约为29kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原，免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体，经酶联免疫检测发现其效价达到1：8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSv的IC．RT-PCR和Dot-blotELISA方法，为该病毒的检测、诊断提供了保障，同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。关键词：水稻草状矮缩病毒；基因；原核表达；多克隆抗体中图分类号：$432．1，$432．4文献标志码：A论文编号：2012．2714PolyclonalAnt

3、ibodyPreparationandApplicationofP2GeneofRicegrassystuntvirusYangLiang，DengPing，WangKaifang，LiuYan，LiuXiaojuan，WuZujian(KeyLaboratoryofPlantVirologyofFujianProvince，InstituteofPlantVirology,CollegeofPlantProtection,FujianAgriculturalandForestryUniversity，Fuzhou35

4、0002)Abstract：P2geneofRicegrassystuntviruswasamplifiedbyRT-PCRfromtheinfectedriceleaves，anditwassubclonedintoprokaryoteexpressionvectorpDEST17toconstructrecombinantexpressionplasmid，whichthenwastransformedintoE．coliRosetta．The29kDaHIS6-tagfusionproteinwasobtaine

5、dwithinductionofIPTGfromEcoliRosettacells．whichwasusedtoimmunizethehealthyrabbitsasanantigen．TheantiserumofP2proteinwasobtainedafterfivetimesinjectionsandtheELISAanalysesshowedthatthepotencyofantiserumwas1：8192．Then，theantiserumwasusedtoestablishtheImmunocapture

6、RT—PCRandDot—blotELISAmethodtodetecttheRGSV．Therefore，theP2proteinandantiserumprovidedthetechnicalsupportforthediagnosisofRGSVdiseaseandproteinfunctionstudy．Keywords：Ricegrassystuntvirus；P2gene；prokaryoticexpression；polyclonalantibody0引言水稻后，表现出的典型症状为病株严重矮化，分蘖增水稻

7、草状矮缩病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)多，似杂草状丛生，叶片细窄而刚，叶片褪绿条纹明显是纤细病毒属(Tenuivirus)的成员之一，由介体褐飞且色泽为淡绿到淡黄或橙黄色，有时会形成大量形状虱(Nilarparvatalugens)以持久、增殖性方式传播，但不不规则的暗褐色或铁锈色斑点，感病后植株瘪粒或不能通过卵、花粉、种子、土壤和机械传播1。RGSV侵染抽穗。因此，RGSV是一种严重的水稻病毒，可造成水基金项目：国家重点基础研究发展规gJ(“973”计划)项目“稻飞虱成灾机理与可持续治理的

8、基础研究”(2010CB126203)；转基因生物新品种培育重大专项“水稻重要细菌和病毒病害抗性调控基因及其元件的发掘和功能分析”(2009ZX08009—044B)；国家“十二五”科技支撑计划项目“农林生物灾害防控关键技术研究与示范”(2012BAD19B03)；福建省教育厅科技项目“RGSV基因沉默抑制子对水稻miRNA代谢的