基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备.pdf

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1、浙江农业学报ActaAgriculturaeZhefiangensis，2011，23(2)：258—262http：／／www．zjnyxb．cn赵立娜，崔言顺，任建亭，等．基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备[J]．浙江农业学报，2011，23(2)：258—262．基因C型鸭肝炎病毒唧基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备赵立娜，崔言顺，任建亭，李建亮，黄兵，李玉峰，马秀丽，(山东农业大学动物医学院，山东泰安271018；山东省农业科学院家禽研究所，山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东济南250023；

2、山东省东营市广饶县中等专业中学，山东广饶257300)摘要：采用RT—PCR方法，扩增基因C型DHVJFX08株的VP1基因，与pMD18一T载体进行连接，构建新型DHVVPI基因克隆重组质粒。然后将j基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中，筛选原核表达载体pET-32a—VP1，进行IPTG诱导表达。SDS—PAGE电泳分析表明，基因C型DHV—VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western—blot检测表明，表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡，以纯化的VP1重组

3、蛋白和基因c型DHV全病毒分别包板，制备的抗血清ELISA效价分别可达1：25600，1：51200，表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。关键词：鸭肝炎病毒；基因C型；VP1基因；克隆表达；多克隆抗体中图分类号：S858．32文献标志码：A文章编号：1004—1524(2011)02—0258—05CloningandexpressionofvPlgeneofDuckhepatitisvirusgenotypeCandpreparationofitspolyclonalantibodyZHAOLi—na’，CUIYan—shun，

4、RENJian—ting，LIJian—liang。，HUANGBing，LIYu—feng，MAXiu—li’(‘CollegeofAnimalScience&VeterinaryMedicine，ShandongAgriculturalUniversity，Tai'an271018，China；InstituteofPoultryScience，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250023，China；SecondarySpecial—izedSchoolin,Guang

5、raoCounty，ShandongProvince，Guangrao257300，ina)Abstract：TheJgeneofstrainJFX08ofDuckhepatitisvirus(DHV)genotypeCwasamplifiedbyreversetran—scription．polymerasechainreaction(RT—PCR)．ToobtainexpressionplasmidpET一32a—VP1，theVP1genewasclonedintopMD18一TandpET一32a(+)vectors．S

6、DS．PAGEanalysisrevealedthattherecombinantVP1proteinofgenotypeCofDuckhepatitisviruswasexpressedinEscherichiacoliBI21(DE3)atahighlevelafterbeinginducedwithisopropyhhio—B—D—galactoside(IPTG)stably．Western—blotrevealedthattherecombinantproteinwasrecognizedspecificallybya

7、ntiseraagainstthegenotypeCofDuckhepatitisvirus．Four—week—oldSPFchickenswereimmunizedwiththeDurifledrecombinantprotein．ELISAestablishedbythepurifiedrecombinantproteinandDHVgenotypeCrevea1edthatthetiterofantiserumwas1：25600and1：51200respectively，whichindicatedthatthere

8、combinantproteinhadgoodimmunogenicity．Keywords：Duckhepatitisvin；genotypeC；VPIgene；cloningandexpression；polyclonalantibody收稿日期：2010—