小鼠IL-1α多克隆抗体的制备及应用.pdf

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1、ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)201I，27(9989·论著·文章编号：1007—8738(2011)09—0989—04小鼠IL-la多克隆抗体的制备及应用林丹丹，刘春亮，包光明，吴康，单琳，刘海燕(苏州大学医学部：肿瘤细胞与分子免疫实验室，生物化学与分子生物学教研室，江苏苏州215123)Preparationandapplicationofpoly-体特性进行初步的鉴定。方法：利用RT-PCR技术，从BALB／c小鼠脾脏eDNA中扩增出IL-1e~的全长基因，酶切后cl

2、onalantibodyagainstmonse—II—,-la连接至pET32a(+)原核表达载体，重组载体测序正确后转化至BI21(DE3)大肠杆菌。利用蛋白质原核表达自动诱导方案LINDan—dan，Chun．1iang，BAOGuang—ming，成功表达重组蛋白。重组蛋白经电洗脱纯化后用以免疫新西WUKang，SHANLin，Hai—yan兰大白兔，获得了抗小鼠IL一1仅的多克隆抗体，ELISA检测抗LaboratoryofCeHul~andMolecularTumorImmunology，体效价。Westernblot和

3、流式细胞术(FCM)检测抗血清的特异DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，MedicalCo1．性。结果：成功构建了重组表达载体pET32a(+)一IL—loL，表1egeofSoochowUniversity，Suzhou215123，China达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔，得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可达1：25600。Westernblot和FCM分析『Abstract]AIM：T0constructarecombinantplasmid该抗体能特异性结合IL一

4、1。结论：利用重组的IL一1蛋白成encodingmouseIL-la(mlL-1a)，expressandpurlfymlL一1o【功制备了高效价、高特异性的兔抗IL一1抗体，为进一步研protein，andpreparejtspolyclonalantibody．METHODS：究IL一1仅的生物学功能奠定了基础。ThecDNAswereobtainedfr0mthespleencellsofBALB／c[关键词]IL-lot；基因克隆；原核表达；多克隆抗体miceandthefulllengthofmlL-1agenewasa

5、mplifiedby[中图分类号]R392．11[文献标识码]BRT-PCR．ThenthemlL—lagenewasinsertedintoapro-karyoticexpressionvectorpET32a(+)andtheresultingre-IL一1(IL一1ot和IL一1B)是一种多功能的细胞因子。combinantplasmidwastransformedintoE．coilBL21(DE3)．1972年Gery等发现在人白细胞的培养上清中含有一Afterauto—induction．themlL-1aprotein

6、wasexpressedandpurifiedbyelectro-elution．Ananti-mlL-lapolyclonalanti-种可溶性物质，起初命名为淋巴细胞激活因子或内bodywasraisedinNewZealandrabbitsafterimmunization源性热原质、破骨细胞激活因子、黑素瘤细胞生长抑withthepurifiedmlL-1dandthetiterwasdeterminedby制因子等，1979年国际统一命名为白细胞介素一1(IL．ELISA．Thespecificityofthepolycl

7、onalantibodywasidenti—1)¨J。IL一1可由多种细胞合成和分泌，如单核细胞、fiedbyWesternblotandflowcytometry．RESULTS：There-巨噬细胞、树突状细胞等J。combinantprokaryoticexpressionvectorpET32a(+)-IL-la小鼠IL一1基因定位于2号染色体，含7个外显wassuccessfullyconstructed．andthemlL-1aproteinwas子。IL-1在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水expressedandp

8、urified．ELISAshowedtheliteroftheanti-平上，IL．1仅和IL一1B在不同种属同源性分别为mlL—laserumwas1：25600．Westernblotandflowcytome—60％～70％和