小鼠抗HCMV-gB多克隆抗体的制备及初步应用.pdf

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1、动物医学进展。2012，33(2)：51-54ProgressinVeterinaryMedicine小鼠抗HCMV—gB多克隆抗体的制备及初步应用韩慧平，于三科(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100)摘要：为了快速制备抗HCMV—gB小鼠多克隆抗体，通过PCR扩增HCMV—gB(57aa～146aa)编码序列并克隆到原核表达载体pET21b(+)多克隆位点，用重组质粒转化大肠埃希茵Rosetta(DE3)并通过IPTG诱导表达，经镍胶亲和层析纯化和透析复性获得重组蛋白。以CpG—ODN和Al(OH)3复合佐剂作为重组

2、蛋白的免疫佐剂，通过0周和3周2次肌肉注射免疫Balb／c小鼠，并在第5周采血分离免疫血清。用ELISA检测免疫血清效价，并通过Westernblot检测免疫血清对哺乳动物细胞表达的HCMV—gB1和gB2的反应性。结果显示，本研究制备的免疫血清ELISA滴度达到1：51200～1：102400，进行Westernblot能够与哺乳动物细胞表达的HCMV—gB1和gB2发生特异性反应。此试验获得了能够用于后续研究工作的抗HCMV-gB小鼠多克隆抗体，本方法具有制备速度快、抗体滴度高和抗原用量少等优点。关键词：CpG-ODN；Al(

3、OH)3；免疫佐剂；多克隆抗体中图分类号：$852．659．5；$858．21文献标识码：A文章编号：1007—5038(2012)02—0051—04巨细胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)感染在MV表面的包膜糖蛋白B(glycoproteinB，gB)全长人及动物中普遍存在，不同的物种具有其特定的病906个氨基酸，介导病毒与宿主细胞的黏附和融合，毒株，我国人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus，是HCMV自然感染中诱生中和抗体的主要保护性HCMV)感染率高达86～96[】]。HCMV感染抗原，因此也

4、是HCMV疫苗研究的主要靶抗原]。对胎儿和免疫功能低下者危害严重L2≈]，而且与动脉本实验室在前期研究基础上构建了两个含有gB中粥样硬化和肿瘤发生密切相关l_4]。研制HCMV疫和表位区域的重组蛋白gB1和gB2，以作为HCMV苗对预防该病毒感染具有非常重要的意义l5]。HC一疫苗的候选抗原。为了对这两个候选疫苗抗原进行收稿日期：2011-09—07作者简介：韩慧平(1985一)，女，河南长垣人，硕士研究生，主要从事动物疫病防控研究。*通讯作者粜米豢豢_j=∈Anti-XOplasmaTestofExtractsofThreeTr

5、aditionalChineseMedicineand／nonotusobliquustroWANGYun-chi，JUYu_lin，YAOLin(AgriculturalCollegeofYanbianUniversity，Yanji，Jilin，133002，China)Abstract：InordertOfurtherstudytheinhibitionoftheactiveingredientsofthreetraditionalChinesemedi—cineandInonotusobliquusandtheircomp

6、lextoToxoplasmainvitro，whichweretheGlycyrrhizauralensis，Scutellariabaicalensis，PortulacaoleraceaandInonotusobliquus，theeffectsofthefourex—tractsandtheircomplexontheinhibitionofToxoplasmainvitrowerecompared．TheresultsshowedthattheextractsofG．uralensisandS．baicalensisha

7、dbetterinhibitioneffects，S．baicalensiswassuperiortoG．uralensis。theP．oleraceaandI．liquusweakeffects．TheeffectofthecombinationofG．uralensisandS．baicalensis，fourextractscombinationweresuperiortothatofothersandartemethergroup．ThecompoundofextractshadgoodinhibitiontoToXOpl

8、asmainvitro．Keywords：traditionalChinesemedicineextract；Toxoplasmagondii；MTTassay52动物医学进展2011年第33卷第2期(总第224期)定性和定量分析，需要获得相应的高