小鼠双尾C基因克隆、Bicc1蛋白多克隆抗体制备及初步应用

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1、内蒙古人学顾十学位论文缩略语MDCKIMCD3G3PDHHEPESTEMEDIPTGDAPIDEPCEDTAPVDFPMSFPAGEBSAFBSPCRSDSD-MEGSTDABTMBPFAPBSRTODrpm英文缩略语英文名称Madin-DarbycaninekidneyInnermedullarycollectingductGlyceraldehydes·-3--phosphatedehydrogenaseHydroxyethylpiperazineethanesulfonicacidTetramethylethy

2、lenediamineIsopropylp—D—thiogalactoside4’，6-Diamidino一2-phenylindoleDiethylpyrocarbonateEthylenediaminetetraceticacidPolyvinylidenefluoridePhenylmethylsulfonylfluoridePolyacrylamidegelelectrophoresisBovineserumalbuminFeta】bovineserumPolymerasechainreactionSodiu

3、mdodecylsulfate13-mercaptoethanolGlutmhione．．S．．transferaseDiaminobenzidineTetrabenzidineParaformaldehydePhosphate—bufferedsalineReversetranscriptionOpticaldensityRotateperminute4中文全称马．达二氏犬肾细胞系小鼠肾髓质集合管内层细胞系3甘油醛．3．磷酸脱氢酶羟乙基哌嗪乙磺酸N，N，N，7N’-四甲基乙二胺异丙基一B-D一硫代半乳糖苷4’，6．

4、二脒基．2．苯基吲哚二盐酸盐焦磷酸二乙酯乙二胺四乙酸聚偏乙烯氟化物苯甲基磺酰氯聚丙烯酰胺凝胶电泳牛血清白蛋白胎牛血清聚合酶链式反应⋯⋯，，⋯，√～十二烷基磺酸钠p巯基乙醇谷胱甘肽巯基转移酶3，3．二氨基苯联胺四甲基联苯胺多聚甲醛磷酸盐缓冲盐水反转录吸光度每分钟转速原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究J二作及取得的研究成果。除本文已经注明引川的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得凼墓直太堂及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同1：作的同志对本研究

5、所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：⋯～趣日期：丛壁!么：f篁日期：在学期间研究成果使用承诺书．心◇。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙．占．火学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师

6、的同意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：煎垒友日期：垄堡厶!歹指导教师签名：日期：}

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8、：}戴宝贞小鼠双尾C基因克隆、Biccl蛋白多克降抗体制备及初步心用小鼠双尾C基因克隆、Biccl蛋白多克隆抗体制备及初步应用摘要双尾．C基因(Bicaudal-C)首先在果蝇(Drosophilamelanogaster)中被发现，其功能丧失导致果蝇胚胎滤泡细胞的错误迁移、头部的缺失和双尾结构的形成。多个物种都含有该基因的同源基因，其中小鼠同源基因Biccl的缺失导致小鼠产生与人

9、类多囊肾疾病高度相似的症状，但其具体功能还未知。克隆小鼠Biccl基因(GeneID：83675)是研究其基因产物功能的基础，本研究以小鼠肾脏组织总RNA为模板体外反转录为eDNA，通过分段巢式PCR及酶切连接的方法获得了全长约3Kb、无突变的小鼠BiccleDNA序列，并成功构建其真核表达载体pCMV-Tag4A-Biccl。根据生物信息学分析结果，选择两个免疫原性较好的蛋白区段61E一199A和711Q．858D作为抗原，PCR扩增相应的小鼠BicclcDNA编码片段，并成功构建其原核表达载体；IPTG诱导表达，

10、回收并纯化融合蛋白GST-Biccl．N。His6和GST-Bicel．N．His6，制备两种兔抗Bicel蛋白多克隆抗体。Westernblot证实这两种抗体具有高度特异性，并用细胞免疫荧光方法及免疫组织化学方法初步分析了该蛋白主要定位于鼠肾细胞的细胞质内，为进一步研究Biccl基因产物的生物功能奠定了良好基础。关键词：小鼠双尾C基因，Bic