水稻矮缩病毒昆明分离物抗血清制备及免疫捕捉pcr检测

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1、第21卷4期中国病毒学21（4）：408-4102006年7月VIROLOGICASINICAJuly2006*水稻矮缩病毒昆明分离物抗血清制备及免疫捕捉PCR检测112111彭潞波，李婷婷，魏春红，方琦，董家红，张丽珍，111**2苏晓霞，丁铭，张仲凯，李毅（1.云南省农业科学院生物技术及种质资源研究所，云南昆明650223；2.北京大学生命科学学院，北京100871）AntiserumPreparationagainstRiceDwarfVirusKunmingIsolateandDetectionbyImmunocapturePCRTests11211PENGLu-bo，LITing-

2、ting，WEIChun-hong，FANGQi，DONGJia-hong，1111**2ZHANGLi-zhen，SUXiao-xia，DINGMing，ZHANGZhong-kai，LIYi(1.TheBiotechnologyandGeneticResourcesInstitute，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Kunming650223，China;2.CollegeofLifeScience,PekingUniversity,Beijing100871,China)Abstract：ByUsingthemodifiedmethodtoext

3、ractRicedwarfvirusvirionsfrominfectedriceleaves,aconcentration3.854mg/mLofpurifiedvirusvirionsreached,andtheRabbitswasimmunizedwithpurifiedvirions,yieldinghightiterantiserum;1:20480bytheindirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(I-ELISA)test.TheantiserumsuccessfullydetectedthreericesamplesfromKunming,

4、YuxiandLuliangbyI-ELISA.Immunocapturepolymerasechainreaction(IC-PCR),respectivelywastheutilizedtoshowthatserologicandmolecularmethodsweresuccessfullyusedfordetectionofRicedwarfvirus.Keyword：Ricedwarfvirus(RDV);Antiserum;I-ELISA;IC-PCR关键词：水稻矮缩病毒；抗血清；间接ELISA；免疫捕捉PCR中图分类号：S432.1文献标识码：A文章编号：1003-5125(2

5、006)04-0408-03由水稻矮缩病毒（Ricedwarfvirus，RDV）引为便于对水稻感病植株的快速检测，本研究对起的水稻矮缩病害，最早由日本报道，随后在东南水稻矮缩病毒的分离提纯方法进行了改进，并用提亚等国以及我国的福建、云南等南方稻区普遍发纯的病毒制品制备了高效价抗血清。应用制备的抗[1]生，云南主要发生于中部及南部地区。水稻在苗血清对RDV云南3个不同地区的分离物进行间接期至分蘖期感病后，植株矮缩，分蘖增多，叶片浓酶联免疫吸附测定（I-ELISA），以及免疫捕捉多聚绿，僵直，出现白斑，生长后期病稻不能抽穗结实，酶链式反应（IC-PCR）测定，建立了快速检测RDV在暴发流行年份

6、可以引起水稻的严重减产。的血清学和分子检测方法。RDV在分类上属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）1材料和方法植物呼肠孤病毒属（Phytoreovirus）成员，病毒粒子为正十二面体球形结构，直径约为69.3nm，无刺1.1实验材料[2]突，无脂蛋白外膜包被，具有双层的蛋白衣壳。提纯用病毒材料采自云南省昆明市市郊感病病毒基因组由12条双链RNA片段组成，其中S8稻田，其他毒源材料分别采自云南玉溪和陆良，水[3]编码病毒外层外壳蛋白，S6编码蛋白与细胞间运稻病株具有明显矮化症状，局部有细小褪绿斑点；[4][5]动相关，RDV侵染寄主还可引起RNA沉默。免疫用兔子购自昆明制药厂实验动物处。收

7、稿日期：2005-12-26，修回日期：2006-02-16*基金项目：国家重点基础研究发展规划项目（G2000016201）作者简介：彭潞波（1975-），女，云南昆明籍，助理研究员，从事植物病毒学研究。**通讯作者：张仲凯（1966-），男（彝族），云南昌宁籍，研究员，从事植物病毒学研究。Correspondingauthor.Tel:0871-5183204,E-mail:zhongkai99@sina